灵芝三萜具有抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等多种生物活性,但其采用常规发酵方法的合成得率较低。真菌激发子通过激活细胞的免疫防卫反应,可以诱导特定基因表达、促进次生代谢。为此专门从栽培灵芝的土壤中分离、筛选出了可促进灵芝三萜合成的罗氏青霉Penicillium rolfsii,并将其制成真菌多糖激发子FPE(Fungal Polysaccharide Elicitor)。本论文以FPE诱导三萜形成的条件优化为切入点,重点研究了FPE诱导下的灵芝初生代谢、三萜生物合成途径及活性氧(reactive oxygen species,ROS)信号传导途径的响应情况,从而揭示了FPE介导灵芝三萜生物合成的调控机制。主要研究结果如下:1.FPE对深层发酵灵芝的生长和三萜合成有促进作用。FPE诱导灵芝三萜合成的浓度效应为最适浓度型,其最适添加浓度为75 mg/L。从指数生长期向平台期转变的灵芝菌丝体对FPE最为敏感。第4 d添加75 mg/L FPE为该激发子的最佳诱导条件,该处理下灵芝生物量和三萜含量分别为14.20 g/L和75.01 mg/g,是对照组的1.50倍和2.07倍。2.FPE促进深层发酵灵芝初生代谢向三萜合成代谢转变。FPE处理24 h后,发现灵芝菌丝消耗了更多还原糖和游离氨基酸,并激活了三萜合成途径,导致灵芝三萜合成关键酶基因表达上调,鲨烯、羊毛甾醇等中间代谢产物显著增加,灵芝三萜含量明显提高。然而,胞内多糖和蛋白质含量未有明显提升。3.FPE通过ROS信号传导途径调控灵芝三萜合成。FPE促使灵芝细胞内ROS积累,导致细胞膜脂过氧化损伤加重,抗氧化酶基因表达上调,抗氧化酶活性增强,说明FPE激活了灵芝的ROS信号通路。同时发现,添加ROS清除剂(NAC、VC)可以降低FPE对ROS信号传导途径的影响,但也会抑制对灵芝三萜合成途径的激活。可见,ROS信号传导途径在FPE诱导下的灵芝三萜生物合成过程中发挥了重要作用。