类黄酮及其氧化产物,如儿茶素、茶多酚、茶黄素、茶红素等,均具有非凡的降脂功能。苹果多酚及其氧化产物也是一类重要的类黄酮,并且在苹果酵素发酵过程中大量产生。目前,苹果多酚的降脂作用已有报道,但是苹果多酚的氧化产物,尤其其代表性成分根皮苷氧化产物及其降脂作用未见报道。为了拓展苹果多酚的应用领域,本研究以根皮苷为原料,在体外用多酚氧化酶大量制备根皮苷氧化物POP2,研究根皮苷酶促氧化的反应历程,分离纯化后用HPLC、ESI-MS、IR对其结构进行表征,检测对比根皮苷与POP2的自由基清除活性,使用3T3-L1前脂肪细胞模型评价POP2的降脂功能,并通过RT-PCR和蛋白免疫印迹检测,研究POP2抑制脂肪细胞分化的分子机制。取得的主要结果如下:(1)根皮苷酶促氧化的最佳条件为:pH=6.5、温度为35℃、底物浓度为3 mg/mL,乙醇添加浓度为20%。当酶促氧化时间为48 h时,反应体系中仅存在POP2—种氧化产物,此时根皮苷的转化率为90.2%,分离纯化后得到纯度为94.7%的氧化物POP2,用质谱分析得到POP2的m/z为467,IR分析得到官能团的特征吸收峰,与推测的POP2的结构式吻合。(2)利用DPPH和ABTS试剂检测了根皮苷和POP2清除自由基的能力,DPPH自由基清除浓度(IC50)分别为:POP2为102.56±0.09μg/mL,根皮苷为278.79±0.34μg/mL,ABTS 自由基清除浓度(IC50)分别为:POP2 为 93.99±0.19μg/mL,根皮苷为153.18±0.24μg/mL,证明了 POP2清除自由基的能力远远强于根皮苷。以POP2为处理药物作用于3T3-L1前脂肪细胞,MTT法检测到POP2可以抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖,IC50分别为:24 h时为1214.342±0.445 μg/mL,48 h时为991.765±0.854μg/mL,当POP2浓度大于300μg/mL就会对细胞产生毒性,细胞的形态发生改变,数目减少,所以分化时选取POP2的浓度梯度均小于300 μg/mL。通过油红O染色观察到POP2处理后的细胞脂滴数量明显减少,定量分化结果显示当POP2浓度为250 μg/mL时可以抑制47.87%前脂肪细胞的分化,细胞内TG的含量随着POP2浓度的增加也逐渐降低,说明POP2能显著抑制前脂肪细胞的分化,抑制细胞内TG的积累。(3)通过RT-PCR检测细胞分化的关键转录因子,当POP2的浓度在50～250μg/mL 时,可以显著下调 PPARγ、C/EBPα、FAS、GLUT-4 的表达;通过 Western blot检测了分化过程中关键蛋白PPARγ和C/EBPα蛋白的表达,发现POP2可以抑制这两种蛋白的表达,并且具有剂量依赖性。本课题利用3T3-L1前脂肪细胞评价了 POP2的降脂功能,推测POP2抑制脂肪细胞分化的机制可能是通过抑制PPAR γ和C/EBP a基因的表达,从而下调其下游基因FAS和GLUT-4,抑制脂肪细胞中脂质的合成,同时证明了根皮苷氧化物POP2有作为抗氧化剂和降脂类成分的潜力,为其应用奠定了理论基础。