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研究背景免疫性血小板减少性紫癜(immune thrombocytopenic purpura,ITP)是一种获得性器官特异性的自身免疫性疾病,以免疫介导的血小板减少为特征。传统的观点认为ITP的发病机制以体液免疫为主,即患者体内产生了针对血小板膜表面糖蛋白(glucoprotein,GP)的自身抗体,介导血小板在网状内皮系统中被巨噬细胞破坏,导致血小板减少。然而,越来越多的资料显示,除体液免疫机制外,ITP尤其是慢性ITP的发病过程中,细胞免疫起着非常重要的作用。已有研究表明Th1/Th2的比例增高与慢性ITP的发病和疾病状态密切相关,并且呈明显的Th1优势反应。Tc1与Th1相似,可分泌IL-2、IFN-γ等细胞因子并且可发挥细胞毒作用,Tc1亚群通过分泌T1型细胞因子在某些自身免疫性疾病和慢性感染性疾病的发生发展中起着重要的作用。Th17细胞是最近发现的一种新的效应性CD4+T细胞亚群,以分泌IL-17为特征,大量证据表明Th17细胞在多种自身免疫性疾病的发生、发展中具有重要的作用。目的本研究的目的是通过对ITP患者外周血Th17、Th1和Tc1细胞亚群及血浆细胞因子的检测,进一步探讨三种细胞亚群在ITP发病机制中的作用及评价它们的临床相关性。材料和方法(1)病例及正常对照的选择:慢性ITP患者30例,均符合ITP的诊断标准,其血小板计数在1～30×10~9/L之间。排除ITP患者合并有病毒性肝炎、糖尿病、高血压、心血管疾病、妊娠、活动性感染或者结缔组织病者。正常对照30例,均为健康志愿者,无感染、无病毒性肝炎、无免疫性疾病及半年内未使用免疫抑制剂、抗HIV抗体阴性、肝肾功能正常,其年龄和性别均与ITP患者相匹配,血小板计数范围为136～298×10~9/L。(2)应用三色流式细胞术检测ITP患者和正常对照外周血中Th1、Th17和Tc1细胞占CD3+T细胞的比例。三种细胞亚群的界定分别为:Th17细胞为CD3+CD8—IL-17A+,Th1细胞为CD3+CD8—IFN-γ+,Tc1细胞为CD3+CD8+IFN-γ+。(3)应用ELISA技术检测ITP患者和正常对照血浆中IL-17和IFN-γ的表达水平。(4)应用改良的MAIPA技术(单克隆抗体特异性俘获血小板抗原技术)测定ITP患者体内的抗血小板膜GPⅡb/Ⅲa和Ⅰb/Ⅸ自身抗体。结果(1) ITP患者外周血Th1细胞的比例(15.50±4.20%)明显高于正常对照组(11.6±4.23%)(P＜0.01),并且ITP患者Tc1细胞的比例(19.96±8.91%)较正常对照组(13.71±6.77%)亦显著升高(P＜0.05)。(2) ITP患者Th17细胞的比例(1.94±0.93%)较正常对照(1.33±0.64%)显著升高(P＜0.05)。(3)在ITP患者中,Th1与Tc1细胞间存在明显的正相关性(r=0.58,P=0.01),Th17与Th1细胞间亦存在显著的正相关性(r=0.61,P=0.007)。(4)巨核细胞数目与Th17、Th1和Tc1细胞亚群之间无明显相关性。抗血小板抗体阳性的患者与阴性患者相比,三种细胞亚群的比例无明显差别。并且初治的ITP患者和复发者相比,三种细胞亚群比例的差别亦无统计学意义。(5) ITP患者血浆中IFN-γ和IL-17表达水平与正常对照相比均无显著性差异。结论我们的研究结果进一步表明,在ITP的异常免疫反应中,Th1和Tc1型免疫反应占优势地位,并且Tc1细胞在ITP的发病中可能发挥了细胞毒作用和免疫调节的双重作用。尤为重要的是,我们研究首次表明,在ITP发生和发展中,Th17细胞亚群比例增加可能是一个重要的决定因素,其与Th1和Tc1细胞协同在ITP的发生、发展中发挥了重要的作用,调节ITP患者中Th17细胞的异常可能成为ITP治疗的新策略。