【摘 要】
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目的通过建立体外血脊髓屏障(blood-spinal cord barrier,BSCB)模型,研究miRNA-429(miR-429)靶向Krüppel样因子6(KLF6)调节紧密连接蛋白(TJ蛋白)转录进而对血脊髓屏障的通透性产生影响。方法将antagomiR-429(沉默组)、antagomiR-429 NC、agomiR-429(增强组)、agomiR-429 NC转染到永生化人脑微血管内
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目的通过建立体外血脊髓屏障(blood-spinal cord barrier,BSCB)模型,研究miRNA-429(miR-429)靶向Krüppel样因子6(KLF6)调节紧密连接蛋白(TJ蛋白)转录进而对血脊髓屏障的通透性产生影响。方法将antagomiR-429(沉默组)、antagomiR-429 NC、agomiR-429(增强组)、agomiR-429 NC转染到永生化人脑微血管内皮细胞(h CMEC/D3)中,再将antagomiR-429、antagomiR-429 NC、agomiR-429、agomiR-429 NC与空白对照和KLF6(+)、KLF6(+)NC、KLF6(-)、KLF6(-)NC共转染到h CMEC/D3中,分别分组为:空白组,agomiR-429 NC+KLF6(+)NC组,agomiR-429+KLF6(+)组,agomiR-429 NC+KLF6(-)NC组,agomiR-429+KLF6(-)组,antagomiR-429NC+KLF6(+)NC组,antagomiR-429+KLF6(+)组,antagomiR-429 NC+KLF6(-)NC组,antagomiR-429+KLF6(-)组。用h CMEC/D3与脊髓星形胶质细胞(Ha-sc)在Transwells滤过器上构建体外BSCB模型。用RT-q PCR、Western blot、免疫荧光法检测Krüppel样因子6(KLF6)蛋白及ZO-1、Occludin、Claudin-5这三个TJ蛋白的表达;通过HRP通量来测量每组体外BSCB的渗透性。结果转染agomiR-429后KLF6的相对表达量较空白组与NC组明显下降(P<0.05),转染antagomiR-429后KLF6的相对表达量较空白组与NC组明显上升(P<0.05)。agomiR-429组的ZO-1、Occludin、Claudin-5这三个TJ蛋白的相对表达量明显低于空白组与NC组(P<0.05),agomiR-429组的HRP渗透率高于空白组与NC组(P<0.05);antagomiR-429组的ZO-1、Occludin、Claudin-5这三个TJ蛋白的相对表达量明显高于空白组与NC组(P<0.05),antagomiR-429组的HRP渗透率低于空白组与NC组(P<0.05)。agomiR-429+KLF6(-)组的ZO-1、Occludin、Claudin-5这三个TJ蛋白相对表达量明显低于agomiR-429+KLF6(+)组(P<0.05),agomiR-429+KLF6(-)组的HRP渗透率明显高于agomiR-429+KLF6(+)组(P<0.05)。antagomiR-429+KLF6(+)组ZO-1、Occludin、Claudin-5这三个TJ蛋白的相对表达量明显高于antagomiR-429+KLF6(-)组(P<0.05),antagomiR-429+KLF6(+)组的HRP渗透率明显低于antagomiR-429+KLF6(-)组(P<0.05)。结论miR-429通过靶向KLF6调节紧密连接蛋白转录进而对血脊髓屏障的通透性产生影响,为继发性脊髓损伤的治疗及其治疗机制提供新的靶点及思路。
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