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目的: 1.了解痤疮皮损中Y染色体性别决定基因相关高迁移率族蛋白盒9(Sox9)表达; 2.观察原代培养人皮脂腺细胞分化过程中Sox9和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达; 3.探讨Sox9基因过表达或沉默对人皮脂腺细胞增殖、分化、细胞周期、皮脂分泌的影响。 方法: 1.收集5例痤疮患者面部皮损以及5例正常人面部皮肤,免疫组化染色检测Sox9表达; 2.取3例正常头皮手术标本,分离与培养原代人皮脂腺细胞;扩增Ad-GFP-Sox9和Ad-miR-Sox9病毒,转染原代培养的人皮脂腺细胞;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫印迹和免疫荧光法检测PPARγ和Sox9表达,MTS和[3H]胸腺嘧啶核苷掺入法测定细胞增殖,碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡,油红O染色检测皮脂水平。 结果: 1.免疫组化结果:在痤疮皮损和正常皮肤中,Sox9表达在表皮基底层和棘层、毛囊外根鞘、皮脂腺和小汗腺细胞核和胞质。痤疮皮损表皮中Sox9阳性染色范围比正常皮肤显著增大。痤疮皮损皮脂腺成熟细胞中Sox9核阳性细胞数明显高于正常皮肤(0.78±0.13 vs0.45±0.03;t=5.559, P=0.003),而增殖细胞中Sox9阳性细胞数在两组中差异无显著性(0.76±0.24 vs0.73±0.09;t=0.328, P=0.758)。 2.皮脂腺细胞分化过程中Sox9和PPARγ表达:qRT-PCR和免疫印迹发现皮脂腺细胞中Sox9和PPARγ表达水平随细胞分化而增高,免疫荧光染色显示皮脂腺细胞核中Sox9表达随细胞融合增加而增多。 3. Sox9过表达或基因沉默对皮脂腺细胞增殖、分化、细胞周期、皮脂分泌影响:Ad-GFP-Sox9转染皮脂腺细胞后,免疫印迹显示Sox9、PPARγ表达增高;MTS和[3H]-胸腺掺入法发现皮脂腺细胞增殖增多;流式细胞术显示S期和G2/M期细胞比例增加;油红O染色发现皮脂分泌增加。Ad-miR-Sox9转染皮脂腺细胞后,免疫印迹显示Sox9、PPARγ表达下调;MTS法发现细胞增殖无明显变化,[3H]-胸腺掺入法显示皮脂腺细胞数量减少;流式细胞术显示G1期和G1前期(凋亡)细胞比例增加;油红O染色观察到皮脂分泌减少。 结论: 1. Sox9在痤疮皮损皮脂腺成熟细胞中表达增加; 2. Sox9促进皮脂腺细胞增殖、分化和皮脂分泌; 3. Sox9基因沉默可能通过阻滞G1/S过渡,诱导细胞凋亡和抑制皮脂腺细胞增殖。