冠突散囊菌有效成分研究

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冠突散囊菌是茯砖茶“发花”工艺中的优势菌群,对茯砖茶独特品质和保健功效的形成具有重要的作用,相关资料报道冠突散囊菌在生长过程中可以产生多种代谢产物。本课题选用从陕西茯砖茶中分离出的冠突散囊菌作为试验菌种,采用液体深层发酵培养,研究了冠突散囊菌菌丝体生长的条件并建立了冠突散囊菌菌丝体生长的动力学模型,同时研究了冠突散囊菌中有效成分黄色素的稳定性及其各个组分的红外图谱。内容如下:冠突散囊菌孢子培养条件研究:以麸皮为培养基,以黄色素得率为指标,通过单因素试验和正交试验优化了冠突散囊菌孢子生长的条件。单因素试验得到冠突散囊菌孢子生长的最适条件为:麸皮与水分比例为1:1.5,培养温度为28℃,培养基pH为4.5,装样量为12%,接种量为5%;正交试验得到冠突散囊菌孢子生长的最适条件为:麸皮与水分比例为1:1.8,温度为28℃,培养基为pH为4.5,装样量为10%,接种量为5%,该条件下黄色素得率最高达3.1%。冠突散囊菌液体培养条件研究:以PDA为培养基,以菌丝体干重为指标,通过单因素试验和正交试验优化了冠突散囊菌菌丝体生长条件。正交试验得出菌丝体生长的液体培养基配方为:马铃薯为20%,蔗糖为4%,硝酸铵为0.3%,KH2PO4为0.15%,MgSO4·7H2O为0.03%,水为100mL,该培养基条件下菌丝体干重可达到0.48 g/100mL;最适宜生长条件为:培养温度为28℃,摇瓶转速为120r/min, pH为5.0,摇瓶装液量为25%,发酵时间为7 d,种子的培养时间为5 d。冠突散囊菌黄色素提取条件研究:基于Box-Behnken响应面试验设计确定了冠突散囊菌黄色素的最佳提取条件。采用单因素试验确定影响冠突散囊菌黄色素得率的主要因素,进一步利用Box-Behnken模型对其进行响应面优化。结果表明:影响黄色素提取效果的主要因素为料液比和提取温度,其次是微波功率。最佳提取条件为:料液比1:38,提取温度56℃,微波功率457W,该条件下黄色素得率为10.08%。实测结果与与响应面拟合所得方程的预测值符合良好,采用响应面法对微波辅助提取冠突散囊菌黄色素的提取条件优化合理。冠突散囊菌黄色素稳定性研究:以不同光源、温度、pH、金属离子、氧化还原剂、食品添加剂及酸为考察因素,以黄色素降解率为指标研究了冠突散囊菌黄色素的稳定性。结果表明:该色素不耐高温,太阳光照下易分解,耐酸、不耐碱;金属离子Fe2+、Cu2+、Fe3+对冠突散囊菌色素有破坏作用,其他金属离子则无不良影响;蔗糖、葡萄糖对色素无影响,苯甲酸钠和双氧水有不同程度的破坏,Vc对色素有保护作用;无机酸的影响明显。冠突散囊菌黄色素分离纯化及其红外图谱分析:利用HPLC分析了冠突散囊菌黄色素的组分,再利用制备型HPLC对冠突散囊菌黄色素进行了分离纯化并对得到了不同组分的红外光谱图。由冠突散囊菌色素HPLC图可知:该色素主要由4种成分组成,其中保留时间为5.823 min的组分所占含量最高,且其结构中含有羟基、甲基、羧基、氨基及苷键、酯键等化学基团。分析黄色素各组分的红外光谱解析可知:四种色素物质的图谱曲线大体相同,但是每个物质又有不同的吸收谱带,黄色素物质中出现了羟基、甲基、羧基、氨基及苷键、酯键的特征峰,各物质又不同程度的含有芳香骨架,由此可知该色素物质含有的功能团比较多,结构复杂。冠突散囊菌液体深层培养菌丝体发酵动力学模型研究:利用5L发酵罐培养冠突散囊菌,在发酵过程中冠突散囊菌菌丝体和黄色素呈现先迅速上升后稳定的趋势;发酵液的pH及其溶解氧(DO)呈现先迅速下降后稳定的趋势;冠突散囊菌菌丝体生长符合logistic方程,其生长动力学模型为:
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