论文部分内容阅读
苦丁茶(Ilex Kudingcha C.J.Tseng)主产于广东、广西和海南,是当地民间传统的药用植物。研究表明,苦丁茶具有明显的生理活性,其临床应用前景乐观,作为一种新药开发具有很高的价值。为了推进苦丁茶化学成分生物活性研究,挖掘该植物的药用价值和为其资源的综合开发应用提供科学依据,本文研究苦丁茶皂苷的检测方法、探讨苦丁茶皂苷的提取纯化条件、建立HPLC法同时检测熊果酸和齐墩果酸的含量、摸索苦丁茶皂苷元的提取工艺参数并确定苦丁茶皂苷元薄层层析的溶剂体系。实验结果如下: 1.建立了苦丁茶皂苷的分光光度分析法。采用香草醛-高氯酸比色法,检测波长为543 nm,以Re(人参皂苷)为对照品,在21.4μg~256.8μg范围内对照品的量与吸光度呈良好的线性关系。回归方程为y=0.003706X+0.0046,相关系数为0.9998,回收率在97.84%~100.12%之间。该方法具有较高的回收率,稳定性、精密度和重复性较好。采用此方法可对苦丁茶皂苷含量进行简便快速的测定。 2.优化了苦丁茶皂苷的提取工艺。结果表明,采用乙醇水溶液为提取溶剂的最佳工艺为:温度65℃、固液比1:12、乙醇浓度80%、提取2次、每次1h。 3.创立了苦丁茶皂苷柱色谱纯化工艺。研究表明,采用D1O1大孔吸附树脂,最佳吸附条件为:料液pH值6、料液浓度14.5mg/mL、流速2BV/h:最佳洗脱条件为先用2Bv水以2.5 BV/h洗脱,再用3 BV70%乙醇水溶液以2.5 BV/h洗脱,产品纯度达到68.92%。 4.首次建立了HPLC法同时测定苦丁茶中熊果酸和齐墩果酸含量的方法。色谱条件为:采用Betasil C18柱;流动相为乙腈:水(95:5);检测波长为210nm;灵敏度为1.000 AUFS;柱温为35℃:流速为0.5 mL/min;齐墩果酸的进样量在0.1744μg~3.488μg范围内峰面积值与进样量之间线性关系良好,平均回收率为93.29%;熊果酸的进样量在0.1992μg~3.984μg范围内峰面积值与进样量之间线性关系良好,平均回收率为95.90%。该方法具有良好的稳定性、重现性和准确性,检测结果可作为衡量苦丁茶质量和苦丁茶皂苷水解的指标。 5.以熊果酸和齐墩果酸总量为考察指标,优化了从苦丁茶中提取皂苷元的工艺。研究表明,皂苷元最佳提取工艺为:3.5mol/L盐酸溶液、固液比1:12、浸