论文部分内容阅读
目的通过研究中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)和肾损伤分子(kidney injury molecule1,KIM-1)在急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)大鼠模型、人肾小管上皮细胞(Human Kidney Cell,HK-2)损坏模型以及临床患者体内的表达和变化,进一步确定血、尿NGAL、KIM-1升高对预测AKI的可能性,为早期诊断AKI寻找可靠的生物学指标。方法1、将40只SPF级的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分成五组。其中四组连续每天腹腔注射100mg/kg硫酸庆大霉素注射液,对照组则注射等剂量的生理盐水。连续注射3d、5d、7d、10d后分别随机处死其中一组,同时间对照组分别随机处死2只大鼠。取出肾脏组织留作病理切片进行HE染色和免疫组织化学实验,同时研磨肾脏组织提取RNA,检测其m RNA表达情况。留取血清及尿液标本检测其生化指标以及NGAL、KIM-1变化。2、分别在不同时间点用0.1μmol/L H2O2处理HK-2,收集细胞上清液检测NGAL、KIM-1分泌水平,同时收集细胞检测m RNA表达情况。3、收集2015年2月-2015年12月临床急性肾损伤患者血、尿标本40例,同时收集20例肾脏健康人的血、尿标本,作为对照。检测其传统生化指标以及血、尿标本中NGAL、KIM-1变化情况。结果1、SD大鼠血清NGAL和尿NGAL、KIM-1均在给药3d后分别达(28.8±3.17)μg/m L、(3.63±0.50)μg/m L、(5.43±1.25)μg/m L,而血清KIM-1在给药5d后达(4.51±0.41)μg/m L;免疫组化结果显示给药3d后肾小管上皮细胞出现NGAL点状表达,随着给药时间的延长,NGAL表达量逐渐增多,颜色由淡红色渐变为深橘红色;在给药3d后KIM-1沉积于肾小管管壁内,并随着给药时间的延长,其表达量逐渐增多,颜色由红色渐变为深橘红色;血清肌酐(serum creatinine,SCr)和尿素(blood urea nitrogen,BUN)在给药7d后达(90.4±1.9)μmol/L、(62.2±1.2)mmol/L;血清胱抑素C(cystatin C,Cys C)在给药5d后达(0.24±0.03)mg/L,与对照组比较具有统计学意义;24h尿微量白蛋白(microalbuminuria,MALB)在给药8d后升至(0.512±0.023)mg/24h,与对照组比较有统计学意义;病理学观察发现给药5d后肾脏逐步出现肾小管扩张,管壁细胞呈阶段脱落、消失以及炎性细胞浸润等变化。2、随着H2O2处理人肾小管上皮细胞的时间延长,细胞培养液上清中NGAL、KIM-1的m RNA相对表达量升高,NGAL的分泌量也逐渐升高,至药物处理12h,NGAL的m RNA表达量及蛋白分泌量均到达高峰,而处理24h后,开始呈下降趋势;而KIM-1则随药物处理时间的推移,其m RNA表达量及蛋白分泌量均呈上升趋势。3、临床标本中,与健康对照组相比较,病例组血液、尿液中NGAL、KIM-1均出现明显升高,其中血液标本分别达到(136.5±18.31)μg/L、(5.21±0.40)μg/L,尿液标本分别为(28.84±4.06)μg/L、(2.11±0.50)μg/L而此时传统生化指标中肌酐、尿素均未见明显改变。结论1、成功构建大鼠急性肾损伤模型,SD大鼠出现急性肾损伤进行性发展的典型表现。肾损伤发生早期,大鼠肾脏组织、血、尿标本中即可检测大量NGAL、KIM-1的表达,提示两者适合作为AKI的早期诊断标志物。2、人肾小管上皮细胞在体外培养过程中被诱导氧化破坏后,大量表达和分泌NGAL、KIM-1,提示两者适合作为判断肾小管上皮细胞损伤的指标。3、临床病例组中血、尿NGAL、KIM-1的浓度均明显高于健康对照组,血Cys C轻度高于健康对照组,提示前两者是AKI的重要诊断指标。