牛结核病是由细胞内寄生的革兰氏阳性牛分枝枝杆菌引起的一种人畜共患病,给人类健康和畜牧业的发展带来了巨大危害。世界卫生组织(WHO)指出:“在存在牛结核的国家中,人类始终受到它的威胁,除非着手消灭牛结核病,否则人类结核病的控制是不会成功的。”目前,一些较发达的国家和地区,如美国、澳大利亚、北欧等已基本消灭了牛结核病,但由于人结核病和野生动物结核病的存在,致使这些国家仍对牛结核处于不断的检疫和高度的警惕之中。在广大的发展中国家,该病仍严重的流行。但近年来,随着分子生物学和免疫学的发展和应用,牛分枝杆菌基因组序列的不断增加及许多重要基因功能的阐明,对该菌致病机理和免疫机制等认识不断加深,这为该病的防治打下了良好的基础。近年来,牛结核病诊断方法逐渐得到改善,发现了很多特异性抗原蛋白编码基因。传统细菌学检测方法、免疫学方法和分子生物学方法相结合,加速了牛结核病诊断技术和产品的研究和开发。牛分枝杆菌外膜蛋白位于细菌细胞膜的最外层,因其具有免疫原性和免疫保护作用一直备受注目。本研究通过对牛分枝杆菌基因组序列分析,选取其外膜蛋白或胞壁蛋白编码基因20个,通过信号肽和跨膜结构分析,选定20种膜外蛋白基因,利用Primer 5.0分析软件设计相应引物。将牛结核分枝杆菌灭活后提取基因组作为模板,通过降落PCR方法扩增目的片段并与原核表达载体PET-32a(+)连接,成功构建了13个牛结核分枝杆菌膜相关蛋白基因重组表达载体;经测序鉴定、诱导表达和SDS-PAGE检测表明,7种膜蛋白重组载体获得表达。最后,以结核病牛临床阳性动物血清为一抗,经Western-blot检测表明7种膜相关蛋白都能与结核临床阳性病牛血清发生免疫学反应,表明本研究选择表达的牛结核分枝杆菌外膜蛋白或胞壁蛋白在感染动物体内具有较强的免疫原性和反应原性,有望成为进一步筛选牛结核病诊断性抗原的候选蛋白,同时这些蛋白的成功表达也成为相关蛋白功能研究的基础。