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本文以黄瓜(Cucumis sativus L.)为研究材料,采用末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)的非培养方法,分析了农用链霉素,苯醚甲环唑,代森锌这3种杀菌剂对黄瓜根、茎、叶的内生细菌群落多样性的影响。
选用黄瓜品种华优一号为材料,经表面消毒,以CTAB法提取黄瓜根、茎、叶基因组DNA,采用带荧光标记的8f-518 r引物扩增黄瓜内生细菌16S rDNA片段,通过带4个碱基的HeaⅢ酶切后,再进行T-RFLP测序,数据分析得到了如下结果:
1、本文采用克隆的方法,得到黄瓜叶绿体DNA和线粒体DNA的阳性克隆,通过测序得到叶绿体16S rDNA和线粒体18S rDNA的T-RFs片段大小分别为295bp和189bp。这两个片段在T-RFLP的分析中被排除。
2、黄瓜根、茎中的内生细菌种群比较丰富,而叶片中则较少。黄瓜根、茎、叶上有些细菌对某种杀菌剂比较敏感,处理后这些细菌的数量减少甚至消失。而有些细菌数量显著增加,这可能是因为它们对杀菌剂不敏感,而其它敏感微生物减少之后,它们获得了更多的生存空间和营养来源。
3、3种杀菌剂处理后,黄瓜叶和茎中内生细菌的多样性指数减少。而在黄瓜根部,处理后的内生细菌多样性指数却有所升高,这说明杀菌剂使内生细菌群落在结构和组成上发生了明显的变化。黄瓜根部内生细菌群落结构多样性受多种因素影响,可能与土壤微生物之间存在的复杂的相互关系有关,并不简单地因农药作用而降低。
4、T-RFLP分析得出黄瓜根、茎、叶中优势的T-RFs片段有222,283,326bp,可知拟杆菌门,厚壁菌门,变形细菌门是优势种群。在叶片中,经杀菌剂处理后有6个T-RFs片段消失(如151,193,201,243,305,和326bp),可知变形菌门和厚壁菌门中的一些细菌对杀菌剂比较敏感,也说明了杀菌剂对黄瓜叶片的内生细菌群落作用最为直接。
5、3种杀菌剂处理黄瓜根茎叶,1~5d内生细菌种群变化达到最大,随着时间的延长,14d后黄瓜内生细菌的多样性指数逐渐恢复到对照的水平,种群结构趋于稳定。其中,农用链霉素对内生细菌的多样性影响最大,苯醚甲环唑次之,代森锌的影响最小。