商品蛋鸡感染禽白血病病毒的发病观察及分离株gp85基因遗传进化分析

来源 :广西大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:felixjun
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禽白血病(Avian leukosis,AL)是一种由反转录病毒科中统称为禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起的禽类多病型的肿瘤性疾病,给家禽业造成了巨大的经济损失。本研究通过对来源于同一个父母代种鸡场同时入雏的4群商品代蛋鸡进行持续的跟踪调查和检测,以研究鸡群感染ALV的情况、鸡群的发病特征和主要生产性能、病毒的分离鉴定及分离株gp85基因的遗传变异情况,为今后对广西蛋鸡中AL的认识、诊断及防控提供依据。  在A、B、C、D四群鸡中,A、C两鸡群从10周龄开始出现明显的临床症状。通过对发病初期的疑似病例进行剖检发现,病鸡呈现明显的内脏器官肿瘤,且在A鸡群病鸡的胸骨内发现有骨髓瘤。临床病鸡样品的PCR检测结果显示,A鸡群为ALV、马立克氏病毒(Mareks Disease virus,MDV)阳性及禽网状内皮组织增殖病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)阴性,C鸡群为MDV、REV阳性及ALV阴性;在发病后期的26周龄时,对临床病鸡样品进行病毒分离鉴定的结果显示,A鸡群为MDV、REV阴性及ALV阳性,C鸡群MDV、REV和ALV均为阴性;在58周龄时,随机采集4群鸡的蛋清和血浆分别进行ALV-p27抗原检测和ALV分离培养,结果表明:A、B、C和D四群鸡蛋清样品的p27抗原阳性率分别为14.29%(15/105)、10.92%(13/119)、0%(0/104)和0%(0/104);A、B、C和D四群鸡的ALV分离阳性率分别为9.78%(9/92)、5.43%(5/92)、0%(0/92)和1.09%(1/92)。  在产蛋性能方面,A、B、C和D四群鸡19-72周龄入舍母鸡产蛋率分别为76.05%、84.94%、78.29%和79.23%。粉壳鸡中A鸡群的产蛋率明显低于B鸡群,而两群褐壳鸡(C、D鸡群)的产蛋率差异不明显。在死淘方面,4群鸡在开产前(0-18周龄)的死淘率分别为37.51%、3.12%、31.78%和1.18%,在产蛋期(19-72周龄)的死淘率分别为18.06%、4.69%、9.58%和9.55%,A鸡群的死淘率明显高于其他鸡群,而C鸡群的高死淘率主要在发病阶段。  对临床病例进行解剖,采集病料接种于DF-1细胞进行病毒分离培养。对细胞培养物分别进行ELISA和PCR检测后确定分离到一株ALV-J毒株,命名为GX201507。对病毒分离株的囊膜糖蛋白基因gp85进行扩增、测序和遗传进化分析发现,分离株GX201507的gp85基因全长924个核苷酸,编码308个氨基酸。在分离株的gp85氨基酸全长序列中,共发现有12个突变位点,其中S182G、A268V、L289H三个位点突变为GX201507株所特有。进化树分析表明,GX201507与国内A、B、E亚群参考株SDAU09C3、SDAU09E3、SD0501的亲缘关系较远,分别位于不同的分支上,而与广西地方品种鸡的ALV-J参考株GX14ZS14、GX14FF01和国内蛋鸡ALV-J参考株FJ201308、GL09DP01及J亚群原型株HPRS103的亲缘关系较近,处于同一个分支上。gp85基因的相似性分析结果显示,GX201507与国内A、B、E亚群参考株SDAU09C3、SDAU09E3、SD0501的gp85氨基酸相似性较低,分别为43.7%、44.3%和43.5%;与J亚群参考株的gp85氨基酸相似性为87.8%~98.4%,其中与J亚群原型株HPRS103的相似性为95.5%,与4株广西地方品种鸡ALV-J参考株的相似性为87.8%~98.4%,与5株国内蛋鸡ALV-J参考株的相似性为88.7%~98.1%,与5株国内白羽肉鸡ALV-J参考株的相似性为89.6%~92.2%,与之相似性最高的是广西分离株GX14FF01,为98.4%。  本课题研究表明,来源于同一个父母代种鸡场同时入雏的4群蛋鸡中,有3群存在ALV感染,但其中仅有一群发生明显的临床疾病,病鸡主要表现为内脏器官肿瘤和胸骨骨髓瘤,且在发病早期存在ALV和MDV混合感染。发生AL的鸡群的产蛋性能明显低于其他同品种的正常鸡群,且在整个饲养期内表现出较高的死淘率。从临床发病鸡群中获得一株ALV-J毒株,该分离株gp85基因与源自国内蛋鸡和广西地方品种鸡分离株的氨基酸相似性高于白羽肉鸡分离株的。
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