目的 2 型糖尿病(T2DM)患者的主要死因是其合并的大血管并发症,动脉粥样硬化(AS)是大血管病变的病理基础,氧化应激反应是触发 AS 的主要原因之一,Tanis 是在 T2DM 大鼠中新发现的蛋白,参与糖代谢的调节,与之相应的人的 Tanis 称之为 SelS,影响氧自由基的清除,可抑制过氧化氢(H2O2)诱导的胰岛 B 细胞的凋亡。本研究旨在通过克隆 SelS 基因,使其在血管内皮细胞高表达,观察 SelS 对 H2O2引起的血管内皮细胞损伤的拮抗效应,为深入研究 SelS 的功能提供一定的实验依据,并探求防治 T2DM 及大血管病变的研究新靶点。 方法 采用 RT-PCR 方法从人脂肪组织中获取 SelS 基因片段,通过两次亚克隆将 SelS 基因片段克隆于 PLNCX2 逆转录病毒载体上,成为重组 PLNCX2-SelS 真核表达载体,并经 ClaI 和 XhoI 双酶切及测序鉴定。用脂质体将 PLNCX2-SelS 质粒及 PLNCX2 质粒转染到血管内皮细胞中,用 G418 筛选后,通过 RT-PCR 检测外源基因的整合,以β- actin为内参照半定量检测 SelS mRNA 表达水平,获得体外 SelS 基因在血管内皮细胞高表达的稳定克隆。将细胞分为未转染组、空载体组和转染组,分别经含 0、100、200、300、400μmol/L H2O2的 1640 培养基培养24h 后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力,并进行统计学分析。