羊踯躅根抗类风湿性关节炎药理作用评价及其化学成分研究

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目的:  1.通过多种药理学方法系统评价羊踯躅根对类风湿性关节炎(theumatoid arthritis,RA)的药理学作用,并对其作用机制进行一定的阐明,为其临床应用提供理论论据和指导。  2.明确羊踯躅根的化学成分,为天然药物化学研究积累资料,并为其进一步的药效物质基础研究提供一定数量的单体化合物。  方法:  1.选用目前最具代表性的CIA模型,以牛的Ⅱ型胶原与弗氏完全佐剂混合乳剂诱导建立CIA模型,通过检测大鼠的足趾肿胀评分、大鼠足趾肿胀体积、血清炎症因子ELISA检测等指标,并结合血清药理学、镇痛实验等体内、外药理学方法初步评价羊踯躅根对类风湿性关节炎的药理学作用;  2.尊重临床用药习惯,以羊踯躅根(Rhododendron molle G.Don)的水提浸膏为研究对象,采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS、HPLC柱色谱、制备薄层色谱、制备HPLC等现代色谱技术,分离单体化合物并通过光谱方法对其化学结构进行鉴定。  结果:  1.CIA体内模型、T淋巴细胞、B滑膜细胞体外增殖实验及镇痛实验结果均显示,羊踯躅根的水提液对RA有一定的治疗效果;  2.CIA大鼠肿胀度评价:初次免疫后,第四周大鼠的足趾肿胀体积及关节炎指数评分达到峰值,随着时间的延长,肿胀出现缓慢消退,部分大鼠关节出现畸形、不能负重及关节强直;  3.CIA大鼠血清中炎症因子水平:CIA模型大鼠血清中的IL-1β和IL-17A水平明显高于空白组及治疗组,并具有显著性差异;  4.从羊踯躅水提浸膏中分离得到13个化合物,运用光谱分析技术IR,EI-MS,ESI-MS,1H-NMR,13C-NMR,2D-NMR等鉴定了其中的12个化合物,分别为:1β-rhodomosidesB(rm-1)、rhodomosidesA(rm-2)、rhodojaponinⅢ(rm-3),rhodojaponinⅥ(rm-4),7S,8S-threo-4,9,9’-trihydroxy-3,3’-dimethoxy-8-O-4’-neolignan-7-O-β-glucopyranoside(rm-5),7S,8S-erythro-4,9,9-trihydroxy-3,3-dimethoxy-8-O-4-neolignan-7-O-β-glucopyranoside(rm-6),7S,8R-threo-4,7,9,9-tetrahydroxy-3-methoxy-8-O-4-neolignan-3-O-β-glucopyranoside(rm-7),(+)-lyoniresinol-3a-O-β-glucopyranoside(rm-8),(-)-lyoniresinol-3a-O-β-glucopyranoside(rm-9),(+)-lyoniresinol(rm-10),(+)-lyoniresinol-3a-O-α-rhamnopyranoside(rm-11),β-谷甾醇(rm-12)。  结论:  1.羊踯躅根具有良好的镇痛效果并对CIA模型大鼠有一定的治疗作用,其治疗RA的效果在CIA模型中显示作用强度低于阳性药甲氨蝶呤和雷公藤多甙;  2.分离得到13个化合物,鉴定了12个化合物,其中有1个新化合物,7个化合物首次从该植物中分离得到。其中4个二萜类化合物,7个木脂素类化合物。
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