目的:本研究采用传统分离分析方法对基胡蜂Vespa basalis(Smith)、大胡蜂Vespa magnifica(Smith)、金环胡蜂Vespa mandarinia(Smith)三种胡蜂毒液中肽类物质的分子量进行分析;利用现代定量蛋白质组学对三者毒液蛋白进行相对定量,鉴定并筛选出蛋白质进行生物信息学处理,并从转录的角度利用第二代测序技术对V.mandarinia的毒腺内mRNA进行高通量测序。方法:1.采用传统十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS)对V.basalis、V.magnifica、V.mandarinia三种胡蜂蜂毒中的蛋白质和多肽成分的分子量组成进行分析。2.基于蛋白质非标记定量技术(Label-free),利用液质联用技术对V.basalis、V.magnifica、V.mandarinia三种胡蜂蜂毒中蛋白质酶解肽段进行相对定量分析,并利用基因本体(Gene Ontology,GO)及京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析揭示了蛋白质在生物学过程(Biological Process,BP)、细胞成分(Cellular Component,CC)、分子功能(Molecular Function,MF)中重要的功能作用。筛选出差异表达蛋白质,并对V.mandarinia及V.magnifica毒液之间中的差异蛋白进行生物信息学分析。3.采用Illumina HiSeq 2000高通量测序技术对V.mandarinia毒腺内mRNA进行测序。结果:1.质谱及凝胶电泳数据结果显示,V.basalis、V.magnifica、V.mandarinia蜂毒样品中包含丰富的肽类成分,其中多肽及蛋白质分别集中在300-3000 Da及11-48 kDa范围内。2.通过质谱分析,蛋白质组学技术从V.basalis、V.magnifica、V.mandarinia蜂毒中共鉴定到蛋白质39个,肽段167个。V.mandarinia vs V.magnifica中筛选25个显著性差异表达的蛋白质;其中有9种蛋白质被上调,而16种蛋白质被下调。3.利用Illumina平台对金环胡蜂毒腺cDNA文库进行测序,序列经过滤、组装后获得了80765条干净和高质量的Unigene序列,与不同数据库比对发现,转录本基因编码蛋白质与正常细胞相似,主要参与蛋白质合成、分泌、输送及修饰过程。结论:1.本实验利用传统分离技术与现代高通量测序技术对V.basalis、V.magnifica、V.mandarinia蜂毒中肽类物质分子量及组成进行了相对系统的研究,由结果可知三种胡蜂蜂毒含有丰富的肽类物质,为后续蜂毒成分研究方法的选择提供方向。2.将V.mandarinia毒腺内mRNA测序结果及其毒液蛋白质质谱鉴定结果相结合,概述了V.mandarinia这种标志性剧毒胡蜂毒液产生的肽和蛋白质。