人类β—防御素—2基因转染293细胞产物抗菌活性的研究

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研究背景:内源性抗菌肽(endogenous peptides)是天然免疫的重要介质,是炎症反应起保护作用的重要分子基础,它是一种小分子阳离子多肽类物质,具有广谱抗微生物活性。人类防御素根据半胱氨酸残基位置及二硫键连接方式的不同,可分为α和β防御素两类。人β-防御素(human beta-defensin,HBD)是一类由34-42个氨基酸残基组成的阳离子小肽,分子量较小(3.5-4.5 kDa),分子内含6个保守的半胱氨酸残基形成3个特征性的链内二硫键,具有广谱抗菌活性,是呼吸道、消化道、泌尿生殖道等粘膜防御系统中的重要介质。目前已发现四种β-防御素,其中hBD-2是1997年在人的银屑病损皮肤中发现,它由41个氨基酸组成,富含阳离子氨基酸和半胱氨酸。通常情况下正常上皮细胞hBD-2不表达或者表达水平很低,但当感染时,HBD-2的表达可以被TNF-a、IL-1β、LPS及细菌等多种原炎剂(Proinflammatory agents)所诱导。HBD-2是呼吸道粘膜抗感染的重要分子基础。肺囊性纤维性病变(Cysitc fibrosis)的病人很容易发生肺部感染,其发病机制与气道上皮细胞离子通道调节蛋白(CFTR)基因缺陷,导致HBD-2的杀菌作用受到抑制有关。在后抗生素时代的今天,耐药性微生物给人类健康带来了新的威胁。人防御素独特的作用机理,可能避免致病微生物对其产生耐药性,因此具有良好的药用前景。目前随着基因工程的进展,已有学者利用原核、真核微生物、植物、COS-7细胞等研究防御素的表达。研究目的:本实验研究目的评估HBD-2基因转染293细胞的培养产物蛋白质的抗菌活性。为进一步研究HBD-2基因转染支气管上皮细胞提供依据。研究方法:本实验利用分子生物学技术构建HBD-2真核表达重组质粒pcDNA3.1-zeo-HBD-2,经脂质体介导转染293细胞,收集培养上清,观察它对多种细菌的抗菌活性。研究结果:本实验通过RT-PCR检测到转染细胞中HBD-2基因表达;并且重组质粒转染293细胞的培养上清的抗菌活性强于对照组。研究结论:HBD-2基因转染293细胞后培养上清有一定的抗菌活性。
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