【摘 要】
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楸灵素(Catalitaxol)是内生真菌FSN002的次生代谢产物,能够抑制肝癌细胞的生长,具有强烈的肝癌抑制作用,其抑癌能力相当于紫杉醇的10倍,但其生物合成的分子机制尚属于空白。
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楸灵素(Catalitaxol)是内生真菌FSN002的次生代谢产物,能够抑制肝癌细胞的生长,具有强烈的肝癌抑制作用,其抑癌能力相当于紫杉醇的10倍,但其生物合成的分子机制尚属于空白。本研究对FSN002不同生长时期的样本进行转录组测序,找到差异表达基因,同时建立紫外诱变与农杆菌介导遗传转化的方法筛选FSN002的突变株,通过突变株来验证楸灵素合成相关基因的功能,进而找到其生物合成途径,为今后高效调控楸灵素的生产奠定理论基础。经转录组测序分析找到一些可能与楸灵素合成相关的基因;建立了筛选FSN002突变株的紫外诱变法,当孢子培养13 h萌发出4-6个细胞,紫外照射时间为6 s,紫外光强为90 000μJ/cm2时,真菌致死率在最佳选育范围90%-95%之间,本研究通过此法筛选到一株不分泌楸灵素的突变株b4;建立了农杆菌介导转化FSN002的方法,通过此方法成功地将农杆菌AGL-1转入到FSN002中,并成功敲除P450基因,获得P450基因缺陷突变株。紫外诱变法与农杆菌介导遗传转化体系的构建,为今后筛选FSN002突变株,验证与楸灵素合成相关的基因功能及其生物合成机制奠定了基础。
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