猕猴桃果皮多酚类物质的提取、分离及对B16细胞黑色素抑制作用的研究

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多酚类物质对皮肤增白和美容有着重要的作用,是护肤保健品中的主要成分。猕猴桃果皮中的多酚类物质含量丰富,可成为美容保健品的原料。本论文旨在研究猕猴桃果皮多酚类物质的提取、富集、美白机制以及美白面膜液的制备。本文通过深共熔溶剂(DESs)以提取猕猴桃果皮多酚类物质,并优化其工艺参数。采取大孔树脂回收法分离富集猕猴桃果皮多酚类物质,用高效液相色谱(HPLC)测定分离富集后的猕猴桃果皮多酚类物质中的单体种类及含量,并探究其抗氧化能力和对酪氨酸酶(TYR)的抑制效果。以诱导剂α-促黑色素细胞激素(α-MSH)诱导的小鼠黑色素瘤细胞(B16细胞)为试验的研究对象,研究B16细胞内TYR活性及黑色素生成含量在猕猴桃果皮多酚类物质作用后的变化;并用猕猴桃果皮多酚类物质提取液制备了美白面膜液,测定美白面膜液的多个基本性质、抗氧化活性及TYR活性。具体研究结果如下:1.猕猴桃果皮中多酚类物质的提取及工艺参数优化以猕猴桃果皮为原料,研究八种DESs对猕猴桃果皮多酚类物质得率的影响,并与传统的水、甲醇和乙醇溶剂作比较,结果表明采用DES-1(氯化胆碱—乙二醇,两者的摩尔比1:2)提取效果最佳。经DES-1含水量、料液比、提取时间、提取温度等单因素试验和响应面设计优化试验得出:DES-1含水量18%、料液比1:29 g/m L、提取时间22 min、提取温度69℃时猕猴桃果皮多酚类物质的得率最高,为(55.53±1.27)mg/g。将得到的猕猴桃果皮多酚类物质提取液简称为KPP粗提液。2.猕猴桃果皮多酚类物质的分离富集和成分测定通过探索大孔树脂种类、吸附时间、解吸时间、KPP粗提液的稀释倍数及解吸液浓度对DES-1提取的猕猴桃果皮多酚类物质(KPP)的分离与富集效果。试验得出:KPP粗提液稀释10倍,用X-5型大孔树脂吸附60 min,用60%乙醇水溶液解吸120 min时KPP分离富集的效果最佳,回收率达(95.42±2.48)%。用HPLC测定分离富集后的KPP成分,共测出10种多酚单体,其中含量较多的为(+)-儿茶素、绿原酸、咖啡酸和表儿茶素。3.猕猴桃果皮多酚类物质的抗氧化活性及对TYR活性的作用经测定分离富集后的KPP的抗氧化活性及对TYR活性的抑制效果,结果表明:KPP的抗氧化能力较好。清除DPPH自由基能力的强弱为:KPP(半数抑制浓度为20.93μg/m L)>抗坏血酸(半数抑制浓度为27.56μg/m L)。清除ABTS自由基能力的强弱为:KPP(半数抑制浓度为41.91μg/m L)>抗坏血酸(半数抑制浓度为46.73μg/m L)。对FRAP还原能力强弱为:抗坏血酸(半数抑制浓度为84.66μg/m L)>KPP(半数抑制浓度为116.83μg/m L)。KPP对TYR有较好的抑制效果,KPP质量浓度为2.6 mg/m L时,抑制率达74.45%。4.猕猴桃果皮多酚类物质基于B16细胞的美白作用研究KPP对B16细胞的细胞相对活力没有影响,无毒性效果。用KPP处理B16细胞,细胞的形态没有观察到大的变化。对于α-MSH诱导的B16细胞,KPP对其黑色素含量及TYR活性均有抑制效果,效果优于曲酸。KPP处理后,B16细胞内TYR的相对活性降低为(69.45±6.82)%,黑色素相对含量降低为(75.08±1.64)%,KPP的美白效果明显。5.猕猴桃果皮多酚类物质美白面膜液制备及指标测定用KPP制备的美白面膜液均匀透亮符合行业标准,且有一定的抗氧化活性,对TYR活性抑制率达到50.06%,表明猕猴桃果皮多酚类物质面膜液在生化水平上具有美白效果。
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