猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, PRRSV)引起的一种高度接触性传染病,以母猪的生殖障碍和生长猪及仔猪的严重呼吸道疾病为主要特征,是目前危害养猪业最严重的传染病之一。病毒基因组变异给该病防治增加了难度,2006年以来,PRRSV变异强毒株给我国养猪业造成不可估量的损失。目前,疫苗免疫是防制PRRS主要方法,快速准确评价疫苗免疫效力在实际生产中具有重大意义。本研究应用化学合成的PRRSV超强毒株GP5蛋白中和性B表位的核心区域(S37HIQLIYNLC46)做为包被抗原,成功建立检测针对该表位抗体的间接ELISA方法。该方法的最适测试条件是,合成肽包被浓度0.2ug/孔,4℃过夜,10%FBS 37℃封闭2h,待测血清1:200稀释,37℃反应1h,二抗1:5000稀释,37℃作用1h,37℃显色12分钟。本方法特异性强,其他四种猪疾病阳性血清呈阴性反应。应用本方法检测免疫攻毒试验猪的血清抗体水平,选择部分血清做中和试验,中和抗体的检出率为80%。对血清检测结果进行统计分析,当检测血清1:200稀释的ELISA抗体水平大于等于0.156,样本能提供攻毒保护力。传统PRRS灭活疫苗免疫保护效力不理想,研制PRRS新型疫苗具有现实意义。本实验依据PRRSV变异强毒株JXA1株主要结构蛋白氨基酸序列,选择具有潜在中和活性的B细胞线性表位,GP3 61-105Aa、GP5 38-45、187-200Aa、M151-174Aa,与外源性辅助T细胞表位进行串联组合,构建多表位串联原核表达载体,转化大肠杆菌BL21-DE3,IPTG诱导表达。共表达四种重组蛋白,2GP3-2GP5-2M、4GP3、4G5和4M。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白的相对分子量分别约为41kDa、39kDa、31kDa、31kDa,与预测大小一致。镍亲和层析纯化重组蛋白后,Western-blotting鉴定,四种重组蛋白均具有较好的反应活性。纯化四种重组蛋白分别辅以常规油佐剂和肥大细胞激活剂(C48/80),免疫5周龄清洁级小鼠,每周定期采血,间接ELISA方法检测特异性抗体水平,在Marc-145细胞上测定血清的中和效价。结果表明,免疫后各组均能检测到高水平的ELISA抗体,但该抗体没有中和活性。二免后一周左右抗体达到顶峰,其中4GP3、4G5和4M三种重组蛋白混合后配合佐剂C48/80产生的抗体水平最高。表明本研究获得的四种表位蛋白2GP3-2GP5-2M、4GP3、4G5和4M均具有良好的免疫原性,为进一步研制PRRSV表位疫苗打下基础。