单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）简称单增李斯特菌,该菌是普遍存在的食源性致病菌,对人和动物健康影响较大。LM入侵宿主细胞的过程极其复杂,涉及多种蛋白分子,其中内化素（Internalin,Inl）与LM毒力有着密切的关系。目前发现该菌有25种内化素,按其发现顺序依次命名为Inl A到Inl J等。迄今,关于InlG基因研究较少,有关其基因生物学的功能及其在LM中作用尚不清楚。因此,本研究以LM的InlG基因为研究对象,进行原核表达、及表达产物反应原性分析;通过小鼠感染试验,研究InlG蛋白对小鼠免疫保护性;构建InlG基因缺失株,初步研究其生物学特性,主要内容如下:1.单增李斯特菌InlG基因原核表达及表达产物反应原性分析以单增李斯特菌标准株ATCC19111菌株基因组为模板,参照GenBank上InlG基因序列,设计并合成引物,运用PCR方法扩增InlG基因,构建重组质粒pET-28a-InlG,将其转化至表达菌BL21（DE3）,加IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示:扩增出InlG基因全长为1473 bp,编码490个氨基酸,成功构建重组质粒pET-28a-InlG;SDS-PAGE结果可见表达产物的分子量约70 ku,且在上清中表达量较高,Western-blot结果表明,纯化的InlG蛋白与LM阳性血清发生特异性反应,说明该蛋白具有良好的反应原性。2.单增李斯特菌InlG蛋白对小鼠的免疫保护性分析将纯化后的蛋白与佐剂混合后皮下免疫小鼠后,测定效价;LM感染小鼠,统计小鼠存活率,评价对小鼠的免疫保护效果;解剖试验小鼠,取肝、脑制作组织切片,比较LM对小鼠组织的损伤。试验结果显示,蛋白免疫小鼠后效价可达到1:51 200以上,具有蛋白有较好的免疫原性;用高于半数致死量的LM菌液腹腔感染小鼠,免疫蛋白组小鼠死亡一半,组织切片观察见免疫蛋白组小鼠脑、肝组织损伤较轻于生理盐水对照组,表明InlG蛋白对小鼠具有一定的免疫保护性。3.单增李斯特菌InlG基因缺失株的构建及生物学特性研究设计InlG基因的上下游同源臂引物,扩增出上下游同源臂臂,用SOE-PCR的方法扩增得到`基因同源臂△InlG,测序比对正确后,连接到穿梭质粒p KSV7构成重组穿梭质粒p KSV7-△InlG。将p KSV7-△InlG电转到LM感受态细胞中,筛选电转的阳性菌,于41℃和氯霉素抗性培养基中传代培养进行同源重组。细菌重组完全后,在30℃和无氯霉素抗性传代培养丢失p KSV7质粒,经PCR鉴定筛选出无氯霉素抗性的基因缺失株,并检测其稳定性;以野生株为对照组,通过不同温度和p H条件下生长特性、生化试验、溶血性试验、小鼠半数致死量（LD50）,研究InlG基因在LM的功能作用。试验成功构建缺失株LM-△InlG,且稳定遗传;InlG基因缺失对LM的生长特性及环境耐受性影响较小;两株菌生化特性无差异,表明InlG基因缺失不影响LM代谢功能;溶血试验结果显示,两株菌均出现了β溶血,即InlG基因缺失对细菌的溶血性无影响;LM-△InlG的LD50为1.0×106.9 CFU,LM的LD50为1.0×106.6CFU,较野生株相差0.3个数量级;小鼠感染试验表明InlG基因缺失后LM的毒力下降。本试验初步探究InlG基因的功能,为进一步研究InlG基因功能以及LM的致病机制奠定基础。