本文采用TaqMan-MGB技术，建立荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法，检测慢性肝病患者外周血单个核细胞(PBMC)中转化生长因子β1(TGF-β1mRNA)表达水平，并分析其表达水平的变化与肝病肝纤维化的关系。 方法1.在TGF-β1基因的外显子1和2之间设计一对引物和一条TaqMan-MGB探针，传统PCR扩增TGF-β1的102bp产物片断，产物纯化后与pUC-T载体连接，构建TGF-β1重组质粒克隆。2.用HindⅢ单酶切重组质粒使质粒完全线性化，以线性化的质粒为模板，加入T7RNA聚合酶体外转录合成带有目的片断的cRNA，使用无RNase的DNaseⅠ消化质粒，乙醇沉淀的cRNA作为FQ-RT-PCR标准品。3.在PCR反应体系中加入与模板互补的TaqMan-MGB探针，根据10倍系列稀释cRNA标准浓度对数和其循环域值(Cyclethreshold,Ct)制作标准曲线，建立荧光定量RT-PCR检测PBMC中TGF-β1mRNA含量的方法。并对本方法进行方法学评价，包括敏感度、线性范围、特异性、重复性和探针的稳定性。4.收集慢性肝病患者外周血标本，应用FQ-RT-PCR定量检测PBMC中TGF-β1mRNA表达水平，应用ELISA方法检测血浆TGF-β1水平，同时应用放射免疫分析方法检测血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原蛋白(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)。 研究表明，以cRNA为标准曲线的荧光定量RT-PCR检测TGF-β1mRNA具有敏感、特异、快速等特点，为TGF-β1mRNA的检测提供方法学依据；慢性肝病患者PBMC中TGF-β1mRNA含量增加，而且与肝脏纤维化活动相关，检测PBMC中TGF-β1mRNA有助于评估肝脏纤维化的程度。