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【目的】海马苔藓纤维出芽(MFS)是人类癫痫及多种动物癫痫模型中最具有特征性的突触重塑。痫性放电能够促进海马苔藓纤维出芽,苔藓纤维出芽的程度与癫痫的严重程度及发作频率密切相关,出芽的苔藓纤维能够促进慢性期癫痫的反复发作,然而其具体分子机制仍未明确。近年来研究发现5-HT6受体(5-HTR6)阻断剂能够改善突触重塑。因此本研究拟通过建立匹罗卡品慢性癫痫大鼠模型,予5-HTR6拮抗剂进行干预,利用行为学、免疫组化、分子生物学方法深入探讨5-HTR6参与MFS的分子机制。【方法】1.动物分组:第一部分:成年雄性SD大鼠(N1=72只),分为空白组(18只)和癫痫组(54只),分别于造模后1、2、4周观察MFS出芽变化及5-HTR6、Fyn、P-ERK1/2蛋白及GAP-43 m RNA表达变化。第二部分:成年雄性SD大鼠(N2=144)分成空白组(18只)、癫痫组(126只),造模成功后再随机分成SE组(模型组),SE+DMSO组(假手术组),SE+SB组(SB药物干预组),SE+PP2组(PP2干预组),SE+PD组(PD98059干预组),SE+SB+PP2组(SB联合PP2干预组),SE+SB+PD组(SB联合PD98059干预组)每个亚组(18只);2.癫痫造模及行为学观察:造模药物选用腹腔注射,先注射氯化锂,16-18h后注射阿托品,半小时后注射匹罗卡品(剂量),按照Racine分级观察发作,未发作可追加剂量(同等剂量),等级达到IV或V级且持续1小时(即癫痫持续状态SE),给予安定终止癫痫发作,纳入实验;于造模后每天9:00-11:00、14:00-16:00行为学观察癫痫大鼠痫性发作频率及程度;3.干预:造模后第3天每天早上9:00-11:00于脑立体定位仪帮助下侧脑室注射干预药物或溶剂,连续给药一周;4.检测指标:于不同时间点断头取脑通过Timm染色观察海马MFS变化,Western-Blot(WB)检测5-HTR6、Fyn、p-ERK1/2的表达,RT-PCR检测GAP-43m RNA表达。【结果】1.造模后第2周进入慢性期,癫痫大鼠出现慢性自发性发作,5-HTR6受体拮抗剂SB-271046能够降低癫痫发作等级及发作频率。2.SE后1周即观察到少量海马CA3区苔藓纤维出芽,随时间延长进行性增加,而空白组未见或只有极少量海马苔藓纤维出芽。SB-271046干预后海马苔藓纤维出芽明显减少,与空白组比较差别具有统计学意义。3.WB结果显示造模后5-HTR6、Fyn、p-ERK1/2表达水平增高,于造模后4W时表达最高,给予5-HTR6受体、Fyn、ERK1/2拮抗剂后p-ERK1/2表达均减少(*P<0.05,SE+SB/SE+PP2/SE+PD vs SE),其中联合应用5-HTR6受体、ERK1/2受体拮抗剂最为明显(@P<0.05,SE+SB+PP2/SE+SB+PD vs SE+SB)。4.RT-PCR结果显示造模后GAP-43 m RNA表达增高,趋势与MFS、p-ERK1/2相一致,予5-HTR6受体、Fyn、ERK1/2拮抗剂后表达均减少,趋势与p-Erk1/2相一致。【结论】氯化锂-匹罗卡品点燃的大鼠癫痫模型痫性放电后出现苔藓纤维出芽,随时间延长出芽程度增多,5-HTR6可能在苔藓纤维出芽过程中发挥重要作用。而SB271046通过抑制5-HTR6介导的Fyn/ERK通路,调控下游GAP-43m RNA表达,从而减少苔藓纤维出芽。