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目的: 应用高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE)技术,建立一种检测尿液和血清中百草枯(paraquat,PQ)含量的方法,尿液标本同时检测肌酐(creatinine,Cr)含量。为临床百草枯急性中毒的诊断、治疗和预后判断提供一项可靠的指标。 方法: 1.建立HPCE方法检测尿液和血清中PQ含量的方法。以标准品和临床标本为分析样本,通过对缓冲体系、分离模式、检测波长和分离电压等电泳条件进行优化,实现临床样本中各种待测物的分离。 2.对本研究建立的HPCE方法进行系统的方法学评价。其评价内容包括:线性范围、检测限、重复性试验、回收试验以及干扰试验。 3.收集2011年1月至2012年6月连云港市第一人民医院15例PQ急性中毒就诊患者的尿液标本(男4例,女11例);26例百草枯急性中毒患者血液标本(男4例,女22例)。以HPCE方法测定中毒患者尿液中PQ、Cr含量,建立PQ/Cr,观察pQ/Cr与中毒患者预后的相关性;以HPCE方法测定中毒患者血清中PQ含量,观察血清PQ浓度与患者预后的相关性。 结果: 1.在毛细管区带电泳(capillaryzone electrophoresis CZE)模式下,25 mmol/L pH1.97甘氨酸-HCl(含40 mmol/L NaCl)为电泳缓冲液,在非涂层石英毛细管(47 cm×75μm内径)中进行电泳。尿液和血清样本离心后用H2O稀释10倍后直接经压力进样(1 p.s.i.,4s),20 kV电压下电泳分离后,通过二极管阵列检测器检测(λ=200 nm)。在该条件下:尿液PQ和Cr在5min内出峰;血清PQ在3.5min内出峰。 2.线性评价结果显示:尿液中PQ和Cr分别在2~1000μmol/L、10~5000μmol/L范围内呈现良好的线性,相关系数(r)分别为0.9998和0.9999(P<0.01),最低检测限(S/N=3)分别为0.125、5.0μmol/L;血清中PQ在2~1000μmol/L范围内呈良好的线性,相关系数γ为0.9999(P<0.01),最低检测限(S/N=3)为0.125μmol/L。 3.尿液PQ和Cr峰面积的平均日内(n=10)变异系数(CV)为2.84%、1.72%,平均日间(n=10)变异系数(CV)为3.62%、3.06%;血清中PQ峰面积的平均日内(n=10)和日间(n=10)CV分别为3.44%和4.27%。 4.本法具有较高准确性,尿液PQ和Cr的平均回收率为88.40%、90.21%。血清PQ的平均回收率为94.21%。敌草快(diquat, DQ)对尿液和血清的PQ测定均无干扰。 5.15例中毒患者尿液中PQ/Cr(μmol/mmol)中位数为12.0(0~338.4),存活组(n=5)尿液PQ/Cr(μmol/mmol)中位数为1.9(0~12.0),死亡组(n=10)尿液PQ/Cr(μmol/mmol)中位数为66.4(4.9~338.4),存活组与死亡组尿液的PQ/Cr比较,差异有统计学意义(P<0.01)。26例PQ中毒患者血清PQ浓度中位数为9.55(0~233.6)μmol/L,存活组(n=10)血清PQ浓度中位数为0(0~2.8)μmol/L,死亡组(n=16)血清PQ浓度中位数为27.1(5.1~233.6)μmol/L。存活组与死亡组血清PQ浓度比较,差异有统计学意义(P<0.01)。 结论: 应用毛细管电泳技术建立的PQ浓度测定方法,样本用量少,检测无需特殊前处理,标本离心稀释后即可直接检测;操作简单、快速;结果准确可靠,为临床血尿中PQ含量检测的常规开展提供有效方法。