有毒动植物体内都含有部分具有高选择性的活性多肽，往往是潜在的很有价值的药物和药物先导物。其中，蜘蛛毒液成分极其丰富，功能多样。近年来，随着对蜘蛛毒素的不断深入研究，发现其在药理学，神经生物学和医学领域都展现出了广阔的应用前景。研究用的蜘蛛毒素大部分从天然的粗毒中提取出来，或用固相合成法获得。然而，随着环境的改变，蜘蛛的种类和数量正急剧减少，仅靠天然资源远不能满足对毒素的全面研究和开发利用的需要。利用固相合成法合成蜘蛛毒素，每次合成量有限，并且试剂昂贵，成本很高。现如今，通过EST策略、PCR方法、RACE方法或基因组DNA克隆编码毒素多肽的基因已不是难题，因此，可以采用基因工程的方法来表达这些蜘蛛毒素多肽基因。目前，比较成熟的原核表达系统是大肠杆菌（E.coli）表达系统，真核表达系统包括：酵母表达系统、昆虫细胞表达系统、哺乳动物细胞表达系统和植物表达系统。敬钊缨毛蛛(Chilobrachys jingzhao)是近年在我国发现的又一蜘蛛物种，分布于广西及海南等地。它的毒液是由许多生物活性成分组成的复杂混合物。从粗毒混合物中分离出的敬钊毒素-Ⅲ（JZTX-Ⅲ）由36个氨基酸残基构成，含有三对二硫键，结构致密，难以表达。本课题利用pET表达系统，成功的表达了毒素蛋白JZTX-Ⅲ。首先根据JZTX-Ⅲ的编码序列设计合适引物，通过PCR的方法扩增得到JZTX-Ⅲ片段，并成功构建了表达质粒pET40b-FrJZTX-Ⅲ，转入BL21(DE3)表达菌株中，分别采用两种不同的诱导方式进行蛋白表达：IPTG诱导和自动诱导。通过实验表明，对于毒素多肽的表达而言，通过自动诱导表达相较于IPTG诱导表达有比较明显的优势：外源蛋白表达量大大提高，可溶的活性成分的比重增大。由于采用的是细胞周质分泌表达方式，带有DsbC标签的融合蛋白被分泌到了E.coli的周质空间，只需通过低渗的方式即可分离可溶蛋白，再通过镍柱亲和层析对融合蛋白进行初步的纯化，然后用肠激酶对其进行消化，释放出完整的毒素多肽，进一步通过RP-HPLC分离得到纯的重组蛋白rJZTX-Ⅲ。最终，将得到的重组蛋白rJZTX-Ⅲ通过SDS-PAGE电泳分析以及质谱鉴定，其结果均显示与天然的JZTX-Ⅲ的分子量一致，通过全细胞膜片钳对其生理学性质进行分析，也证明了重组蛋白rJZTX-Ⅲ与天然的JZTX-Ⅲ的活性一致。另外，在实验条件方面，通过对于诱导温度、诱导时间以及摇床转速做了一系列的摸索，我们发现：低温25℃左右能大大提高可溶蛋白的产量，诱导时间在20h左右较为合适，转速对于表达的影响不大。