目的与背景: 肺癌是最常见的恶性肿瘤。目前，手术切除仍然是肺癌的主要治疗手段。但是在已经发现的肺癌患者中约80％在诊断时已属晚期或有转移，失去了手术治疗的机会，放化疗技术近年来虽有较大发展，但其治疗中晚期肺癌患者仍有一定的局限性。而目前自体或脐血CIK细胞过继免疫治疗等生物疗法在抗肿瘤方面的研究已经取得了一定的进展。有文献报道脐血CIK细胞在体外的扩增能力和杀伤活性两个方面均优于自体CIK细胞[1]。但是脐血CIK细胞输入患者后的疗效还有待于进一步临床试验去检验。本研究拟通过分离诱导脐血单个核细胞产生CIK细胞后，将产生的脐血CIK细胞输注入在本院收集的恶性肿瘤患者静脉血进行生物治疗，进行疗效观察。同时观察经过继免疫治疗后的肿瘤患者外周血的PBMC对瘤细胞(人红白血病细胞株K562、人肝癌细胞株Hepa-CEA+及Hepa-CEA-) 的自然杀伤作用(或NK活性)，以期为脐血CIK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤患者的临床疗效研究提供一定依据。 方法: 1．脐血CIK细胞的诱导制备：无菌条件下采集脐血后，用Ficoll-Hypaque淋巴分离液分离出脐血单个核细胞，在该单个核细胞浓度为3-5×10<6>/ml的无血清RPMI-1640培养基中加入INF-γ至终浓度为1000U/ml。培养24h后，加入IL-1、IL-2、CD3MeAb等细胞因子，使其终浓度分别为100U/ml，1000U/ml，300U/ml。隔天半量换液，保持IL-2的终浓度为1000U/ml。培养7天后收集CIK细胞，并进行脐血CIK细胞的计数、活度测定及其杀伤活性(或细胞毒活性)的测定。同时检测鉴定诱导产生的脐血CIK细胞的免疫表型，并进行脐血CIK细胞的安全性检测。 2．脐血CIK细胞过继免疫治疗中晚期肺癌病人：收集的脐血CIK细胞经静脉输注入肺癌病人，每次输注CIK细胞数为2～8×10<8>，每天或隔天输注一次，共输注6～10次，总细胞数为2.5～6.2×10<8>。分别于输注CIK细胞最后一次当天或第2天抽取4-5ml静脉血，以观察CIK细胞疗效。并于免疫治疗前也分别常规采集静脉血，分离出单个核细胞以进行免疫功能变化检测。 3．流式细胞术(FMC)检测经过继免疫治疗的肺癌病人外周血中淋巴细胞计数的变化：无菌条件下采集经脐血CIK细胞过继免疫治疗前后的肺癌病人外周血，用Ficoll淋巴液分离出病人外周血淋巴细胞，于流式细胞仪上进行检测各种淋巴细胞的绝对计数，以观察治疗前后淋巴细胞计数的变化情况。 4．MTT法检测经过继免疫治疗的肺癌病人外周血PBMC对靶细胞 (K562、Hepa-CEA+及Hepa-CEA-细胞)的体外NK杀伤活性：于无菌条件下采集病人治疗前后的外周血，用Ficoll淋巴液分离液分离出外周血单个核细胞PBMC，以此PBMC细胞为效应细胞，以K562、Hepa-CEA+及Hepa-CEA-细胞为靶细胞，用MTT法检测病人外周血PBMC对该靶细胞的NK杀伤活性。 结果: 1．脐血CIK细胞的制备：诱导的脐血CIK细胞具有CD3<+>CD56<+>，且CD3<+>与CD56<+>均达90％以上，经安全性检测，脐血CIK细胞无细菌、无病毒及内毒素污染，安全可靠。 2．脐血CIK细胞过继免疫治疗中晚期肺癌病人：脐血CIK细胞静脉输注肺癌病人后，病人主观无不良反应，且病人免疫系统功能有所改善。 3．流式细胞术检测经过继免疫治疗的肺癌病人外周血中T淋巴细胞亚群计数的变化：经脐血CIK细胞过继免疫治疗肺癌病人后，肺癌病人外周血T、Th、Ts淋巴细胞计数增加，且T、Th淋巴细胞数增加幅度较大。但Th/Ts比值几无变化。 4．流式细胞术检测经过继免疫治疗的肺癌病人外周血中B淋巴细胞及NK细胞计数的变化：过继免疫治疗后，肺癌病人外周血B淋巴细胞及NK细胞计数虽有增加，但不明显。 5．MTT法检测过继免疫治疗的肺癌病人外周血PBMC对K562的体外细胞毒活性：过继免疫治疗后，肺癌病人外周血PBMC对K562的体外NK杀伤活性虽然增加不显著，但结合专业意义，其杀伤活性还是有所增加。 6．MTT法检测过继免疫治疗的肺癌病人外周血PBMC对Hepa-CEA+及Hepa-CEA-细胞的杀伤活性：在专业意义上，该病人外周血PBMC对Hepa-CEA+细胞的杀伤活性增加比对Hepa-CEA-细胞的杀伤活性增加的要多，尽管二者杀伤活性改变幅度差异无统计学意义。 结论: 1．制备的脐血CIK细胞安全、可靠，可用于本试验中晚期肺癌患者的过继免疫治疗研究。 2．中晚期肺癌病人经脐血CIK细胞过继免疫治疗后，其免疫功能有不同程度的改善，T、B淋巴细胞及NK细胞均有不同程度的升高，其中以T及Th淋巴细胞升高较为普遍。 3．脐血CIK细胞对中晚期肺癌病人过继免疫治疗疗效的主要免疫学指标可能为T及Th淋巴细胞计数变化情况。 4．脐血CIK细胞作用于肿瘤细胞是以T淋巴细胞介导的细胞免疫为主，而T及Th淋巴细胞增殖可能是脐血CIK细胞抑制肺癌细胞生长的主要环节。 5．脐血CIK细胞过继免疫治疗肺癌患者后，其外周血的单个核细胞对K562肿瘤靶细胞有一定的杀伤作用。且治疗后患者外周血PBMC的杀伤活性较治疗前杀伤活性高。