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胎盘植入(placenta accreta)主要表现为过度侵袭子宫肌层的绒毛伴随着大量异生的血管,而导致产时及产后严重大出血。研究植入胎盘中滋养细胞过度的侵袭行为机制,给临床的诊断和治疗提供更多的策略和思路,有着非常重要的意义。但是目前胎盘植入滋养细胞过度侵袭机制并不清楚。根据趋化因子CXCL12及受体CXCR4/CXCR7具有趋化粘附、血管生成的功能,因此我们假设CXCL12介导的调控在胎盘植入的发展中应该发挥着重要的作用。本研究首先通过检测CXCL12、CXCR4和CXCR7在孕晚期植入性胎盘组织标本中的表达情况,探讨CXCL12、CXCR4和CXCR7与胎盘植入的关系;其次检测分析孕晚期胎盘植入孕妇分娩前血CXCL12水平,探讨CXCL12能否成为预测胎盘植入血生化指标;再利用慢病毒介导RNA干扰/过表达技术,构建稳定沉默或过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7蛋白的单克隆滋养细胞株,探索抑制或过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后对滋养层细胞生物行为的影响;同时探索CXCL12、CXCR4和CXCR7对滋养细胞侵袭力调控的可能下游蛋白和信号通路,为胎盘植入的诊断和治疗提更多供理论依据和新的方向。第一部分趋化因子CXCL12和受体CXCR4/CXCR7在植入性胎盘组织中的表达及意义目的检测CXCL12、CXCR4和CXCR7在孕晚期植入性胎盘组织标本中的表达情况,探讨CXCL12、CXCR4和CXCR7与胎盘过度侵袭的关系。方法采用病例对照研究的方法,回顾性研究2010年1月-2015年12月在广西医科大学第一附属医院住院分娩的孕晚期胎盘植入孕妇39例(粘连性胎盘17例,植入性胎盘16例,穿透性胎盘6例),选取孕周匹配的健康剖宫再孕孕妇39例作为对照组。分为:(1)植入部位组;(2)非植入部位组;(3)正常组。应用免疫组织化学染色的方法,分析各组胎盘组织蜡块中CXCL12、CXCR4和CXCR7蛋白的分布和表达水平,同时通过病例电子系统收集相关临床资料。结果1)胎盘植入组子宫切除率明显高于对照组;2)CXCL12及受体CXCR4和CXCR7蛋白主要表达在胎盘滋养层细胞;3)免疫组织化学染色评分显示植入部位组与非植入部位组比较,CXCL12、CXCR4和CXCR7评分差异无统计学意义(CXCL12:P=0.724;CXCR4:P=0.609;CXCR7:P=0.745),与对照组比较,植入部位CXCL12、CXCR4和CXCR7评分显著升高(CXCL12:P<0.001;CXCR4为:P<0.001;CXCR7:P<0.001);4)CXCL12、CXCR4和CXCR7的评分随植入深度的加深(粘连组、植入组、穿透组)呈显著上升趋势(P<0.001)结论趋化因子CXCL12及受体CXCR4/CXCR7在植入性胎盘滋养细胞中高表达,其表达强度与滋养细胞的侵袭深度密切相关,CXCL12、CXCR4和CXCR7在胎盘植入的发展中可能发挥着重要的作用。第二部分趋化因子CXCL12在胎盘植入孕妇血循环的水平及意义目的检测CXCL12在孕晚期胎盘植入孕妇循环血液和胎盘滋养细胞的水平,探讨血CXCL12能否成为预测胎盘植入血生化指标。方法采用病例对照研究的方法,选取2016年1月-2017年9月在广西南宁市三所三甲医院病产前和术后病理均诊断为胎盘植入(33例,其中10例胎盘穿透,14例胎盘植入,9例胎盘粘连)的孕妇进行研究,33例前置胎盘和33例剖宫再孕的孕妇根据孕周配对成为对照。分为:(1)胎盘植入组;(2)前置胎盘组;(3)正常对照组。应用ELISA方法检测各组孕妇分娩前血浆CXCL12水平,免疫组织化学染色的方法检测各组胎盘滋养细胞CXCL12水平,同时收集各组孕妇相关临床资料。结果1)与前置胎盘组(2249.02±501.97 pg/m L)和正常对照组(2207.42±441.84 pg/m L)相比,胎盘植入组血浆中CXCL12水平显著升高(3144.19±701.56 pg/m L),差异有统计学意义(P<0.001);2)比较胎盘穿透组(3476.09±49.73 pg/m L)、胎盘植入组(3046.89±643.40 pg/m L)和胎盘粘连组(2926.76±898.69pg/m L)的血浆CXCL12水平,差异无统计学意义P>0.05);3)胎盘植入组、前置胎盘组和正常对照组的孕妇血循环CXCL12水平与胎盘滋养细胞CXCL12表达的相关性分别为r=0.789,(P<0.001);r=0.355(P=0.043)和r=0.649(P<0.001);4)诊断性试验结果:曲线下面积(Area Under the Curve,AUC)为0.879(95%CI:0.794-0.964),血CXCL12辨别植入的最佳阈值为2581.12 pg/m L,其灵敏度为87.9%,特异性为78.8%。结论胎盘植入孕妇血液中CXCL12水平显著升高,胎盘滋养细胞CXCL12的高表达可能是血CXCL12的重要来源,CXCL12有潜力可能成为胎盘植入的预测生化指标。第三部分沉默/过表达CXCL12,CXCR4和CXCR7基因对滋养细胞的调控作用目的探讨沉默/过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后对绒毛外滋养细胞株HTR-8/SVneo和人胎盘绒毛癌细胞株JAR增殖、迁移侵袭、细胞凋亡生物学功能的影响。方法1)利用慢病毒介导RNA干扰/过表达技术,将shRNA或CXCL12、CXCR4和CXCR7基因导入绒毛外滋养细胞株HTR-8/SVneo和人胎盘绒毛癌细胞株JAR中,经过抗性筛选,建立稳定沉默和稳定过表达的单克隆滋养细胞株;2)应用实时荧光定量RT-PCR及Western Blot法检测沉默/过表达效果;3)CCK8试验检测细胞増殖;4)划痕实验检测细胞迁移能力;5)Transwell侵袭试验检测细胞侵袭能力;6)流式细胞技术检测细胞凋亡。结果1)成功构建稳定沉默或过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7蛋白的滋养细胞株,分为沉默组:HTR-8/SVneo和JAR/sh CXCL12、HTR-8/SVneo和JAR/sh CXCR4和HTR-8/SVneo和JAR/sh CXCR7;表达组:HTR-8/SVneo和JAR/OE-CXCL12、HTR-8/SVneo和JAR/OE-CXCR4和HTR-8/SVneo和JAR/OE-CXCR7;过表达阴性对照组(过表达空载转染);沉默阴性对照组(sh空载转染)和空白对照组。2)过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后HTR-8/SVneo和JAR细胞增值率明显升高(P<0.05),抑制CXCL12、CXCR4和CXCR7基因HTR-8/SVneo和JAR细胞增值率明显下降(P<0.05);3)过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后细胞迁移距离明显增加(P<0.05),抑制CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后细胞迁移距离明显减少(P<0.05);4)过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后细胞穿过人工基底膜的数量增加(P<0.05),抑制CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后细胞穿膜数减少(P<0.05);过表达或抑制CXCL12、CXCR4和CXCR7后细胞凋亡数无改变增多(P>0.05)。结论在体外细胞实验中,趋化因子CXCL12及受体CXCR4/CXCR7均参与了滋养细胞增殖、迁移侵袭的调控,因此CXCL12、CXCR4和CXCR7在胎盘植入绒毛过度侵袭中发挥着重要的作用。第四部分探讨趋化因子CXCL12和受体CXCR4/CXCR7影响滋养细胞侵袭能力的分子机制目的通过调控CXCL12、CXCR4和CXCR7基因水平,检测HTR-8/SVneo和JAR细胞Rho A、Rac1和Cdc42蛋白水平变化以及Rho/Rock、PI3K/AKT信号通路的活化情况,进一步探讨CXCL12、CXCR4和CXCR7影响滋养细胞侵袭能力的可能机制。方法1)应用Western blot检测沉默/过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后HTR-8/SVneo和JAR细胞Rho A、Rac1和Cdc42蛋白水平;2)Western blot检测沉默/过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后HTR-8/SVneo和JAR细胞Rho/Rock、PI3K/AKT信号通路蛋白表达及磷酸化;3)在稳定过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7基因的HTR-8/SVneo和JAR细胞株中加入Rock抑制剂Y-27632或PI3K抑制剂NVP-BEZ235,Transwell侵袭试验检测细胞侵袭能力。结果1)沉默或过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7的表达水平可以抑制或上调HTR-8/SVneo和JAR细胞Rho A、Rac-1和Cdc42蛋白的表达;2)沉默或过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7的表达水平可以抑制或上调HTR-8/SVneo和JAR细胞Rho/rock通路上rock和磷酸化肌球蛋白轻链(MLC)以及PI3K/AKT通路上磷酸化AKT蛋白表达;3)用Rho/Rock、PI3K/AKT信号通路抑制剂后,过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7的HTR-8/SVneo和JAR细胞侵袭能力减弱。结论CXCL12、CXCR4和CXCR7通过调控下游Rho/rock、PI3K/AKT信号通路上MLC和AKT蛋白的磷酸化活化,以及下游蛋白Rho A、Rac1和Cdc42抑制或增强HTR-8/SVneo和JAR细胞的侵袭能力。