论文部分内容阅读
[背景]EphB2是受体酪氨酸激酶家族中的一个亚型,在海马中表达丰富,对突触的发育和信号传导起重要作用。研究证实,在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)患者和AD转基因模型小鼠海马中的EphB2表达下降,而且海马齿状回表达EphB2慢病毒质粒可以逆转AD模型小鼠(hAPP J20)的NMDA受体依赖的长时程降低,改善学习记忆障碍。我们以前的研究证实细胞水平激活EphB2受体可以降低tau磷酸化。但是整体水平EphB2是否调节tau磷酸化及其机制尚未见报道。糖尿病和AD有着极其密切的关系,糖尿病小鼠海马中tau磷酸化程度明显升高,EphB2是否参与了糖尿病诱导的AD样病理改变尚未见报道。[目的]在体水平探讨EphB2对tau磷酸化的作用及其机制及EphB2对高糖引起的tau磷酸化的作用。[方法]用立体定位注射的方法在hTau小鼠海马CA3区给予ephrinB1/Fc,对照组给予Fc。免疫组化和western-blot检测EphB2在海马中的表达,EphB2活性检测试剂盒检测EphB2的活性变化。免疫荧光和western-blot检测tau磷酸化的相关位点。Western-blot检测GSK3β,Akt, PI3K的表达，。用尾静脉注射的方式构建Ⅰ型糖尿病小鼠模型,按血糖浓度的高低分为轻度高血糖组(7-10mmol/L)、中度高血糖组(10-20mmol/L)、高度高血糖组(20-30mmol/L)。 Western-blot检测EphB2及tau磷酸化位点Ser396, Thr231在不同血糖浓度的糖尿病小鼠海马中的表达。Western-blot检测Ser396, Thr231在给予不同浓度葡萄糖含量的培养基的HEK293细胞中的表达及过表达并激活EphB2后,Ser396, Thr231的表达变化。[结果]在拟AD转基因小鼠(hTau)模型中,EphB2的表达量及活性均未见明显变化。CA3区给予ephrinB1/Fc激活EphB2受体后,我们观察到hTau小鼠的tau磷酸化水平明显降低,同时激活磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)和蛋白激酶B(protein kinase B, PKB或Akt),抑制糖原激酶合酶-3β(glycogen synthase kinase-3β, GSK-3p)。在四氧嘧啶构建的Ⅰ型糖尿病模型小鼠中,中(10-20mmol/L)、高(20-30mmol/L)血糖组小鼠海马中EphB2表达明显下降,tau磷酸化明显增高。在HEK293/tau细胞中高血糖组tau磷酸化程度明显增高,而过表达EphB2受体后,tau磷酸化表达水平下降。[结论]EphB2在hTau小鼠海马中表达量及活性都未见明显改变。激活hTau小鼠海马中的EphB2受体可以通过PI3K-Akt-GSK3β信号通路降低tau磷酸化水平。EphB2在中、高血糖组糖尿病小鼠中表达下降,在HEK293/tau细胞中过表达并激活EphB2受体可以逆转高糖引起的tau磷酸化。