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消化道不仅仅是消化器官,也是重要的免疫器官,在抵抗病原微生物的入侵过程中发挥十分重要作用。天然免疫是宿主对抗外来微生物感染的第一道防线,当微生物入侵时,宿主通过病源模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRRs)识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMs)并启动天然免疫,从而发挥防御作用。Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)是天然免疫系统中一类模式识别受体,由胞外区、跨膜区、胞浆区三个部分组成。TLR4(Toll-like receptor4,TLR4)是人类发现的第一个TLR相关蛋白,所有的细胞系几乎均有分布,目前对它的研究受到越来越多的关注。但有关TLR4在鸡肠道内的分布规律以及TLR4与鸡肠黏膜免疫的关系研究还较少。因此,本课题以1-6周龄科宝肉鸡为研究对象,通过研究不同日龄鸡肠道内TLR4及神经-免疫.内分泌相关细胞的变化规律以及脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激对其的影响来探讨它们与肠道黏膜免疫的关系,主要研究内容如下：1鸡小肠内TLR4的增龄性变化规律为研究免疫因子TLR4在不同日龄鸡小肠内的分布及变化规律,探讨TLR4对鸡小肠黏膜免疫作用的可能机制,本课题采用免疫组化SABC方法对鸡小肠内TLR4的分布及表达变化做出研究。结果显示：不同日龄鸡小肠内均表达TLR4,且具有较为明显的日龄依赖式规律,表现为随着日龄的增加,TLR4在小肠内的表达逐渐增强,同一时期的小肠中,TLR4在十二指肠内分布最多,空肠次之,回肠内分布最少。TLR4主要在肠上皮、肠黏膜固有层表达,肠腺周围的固有层内TLR4阳性细胞表达量较多,细胞多散在分布,也有少量集合成簇,形态多样。这一研究结果提示我们,鸡的肠道粘膜免疫是一个逐渐发育完善的过程,肠黏膜固有层为小肠发挥免疫功能的主要场所,且TLR4的增龄性表达可能与机体抵御微生物的感染所做出的防御性免疫反应相关。2LPS刺激对鸡小肠内TLR4表达的影响本实验采用LPS刺激模拟细菌感染后,研究TLR4在小肠内的分布及表达变化,以探讨TLR4在黏膜免疫中发挥作用的机制。研究结果显示：LPS处理组较生理盐水注射组小肠内的TLR4表达强烈,其分布规律大致相同,主要分布于黏膜固有层,其中肠腺周围及靠近上皮的固有层内表达量较多,实验结果还发现在肠上皮有较强的TLR4阳性信号表达,进一步验证了肠上皮、黏膜固有层以及肠腺是肠黏膜免疫的主要场所,另外,也证实了外源性病原微生物入侵时,TLR4与肠黏膜固有层、肠腺及上皮处所介导的免疫反应作用密切,在维持肠道正常生理功能上发挥着一定的作用。3嗜银细胞在鸡小肠内的分布规律本研究采用镀银染色法观察鸡小肠内嗜银细胞的分布及变化规律,探讨神经内分泌与免疫的关系。研究结果显示：嗜银细胞在各日龄阶段鸡小肠内均有表达,且随着日龄的增加呈现“波浪式”的变化规律,即：1.3周龄的嗜银细胞不断增加,至4、5周龄减少,6周龄又有一个显著的增加趋势,嗜银细胞主要分布于肠黏膜固有层,多散在分布,也有一些分布较为集中,嗜银细胞的形态各异,呈梭形的细胞多分布于靠近上皮的固有层内,而圆形及不规则圆形的细胞则多集中于中央固有层及肠腺周围固有层。较多的嗜银细胞的分布位置及细胞形态与TLR4的实验结果一致。这一结果提示我们,嗜银细胞在肠道内发挥着免疫细胞相类似的免疫保护作用,而发挥作用的机制有可能是通过神经.免疫.内分泌网络及TLR4共同调节的。4LPS刺激对鸡小肠内嗜银细胞的影响为了探究嗜银细胞与黏膜免疫的关联作用,本实验通过镀银染色法来观察注射LPS后鸡小肠内嗜银细胞的变化规律,以进一步探讨嗜银细胞与黏膜免疫的关系。实验结果显示,LPS处理组肠道内嗜银细胞较生理盐水处理组显著增多,主要还是分布在肠黏膜固有层,除了细胞数量有所增加外,细胞形态、分布位置等也都存在一些变化,如十二指肠中的梭形细胞数量增多,细胞质内的颗粒性物质较多的指向肠腔,空肠及回肠中有大量的嗜银细胞聚集在肠绒毛固有层及肠腺周围,这一系列的变化表明,嗜银细胞在肠黏膜免疫中发挥着重要的作用。TLR4及嗜银细胞在LPS刺激下的变化规律提示我们,嗜银细胞在介导肠道黏膜免疫机制中与TLR4具有紧密的关联。