【摘 要】
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本研究制备了三种磺胺药的多克隆抗体,建立了快速检测磺胺甲噁唑的斑点免疫金渗滤法,为该技术在畜产品中磺胺药残留检测上的应用奠定了基础。研究结果如下:分别以HSA、RSA为载
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本研究制备了三种磺胺药的多克隆抗体,建立了快速检测磺胺甲噁唑的斑点免疫金渗滤法,为该技术在畜产品中磺胺药残留检测上的应用奠定了基础。研究结果如下:分别以HSA、RSA为载体用重氮化法合成人工免疫原SMZ-HSA、SN-HSA、SDM-HSA及SMZ-RSA,以OVA为载体合成相应的包被原;经紫外扫描和高效液相色谱分析,表明合成成功。用合成的SMZ-HSA免疫原免疫鼠和兔,SN-HSA、SMZ-RSA及SDM-HSA三种免疫原免疫兔,所得抗血清经琼脂扩散试验测定其效价分别为1:32、1:16、1:16、1:8、1:16;ELISA法测定其效价依次为1:512000、1:256000、1:256000、1:64000、1:320000。经ELISA法检测四种兔多抗与OVA均无交叉反应。间接竞争ELISA试验表明, SMZ-HSA兔多抗、SMZ-RSA兔多抗、SN-HSA兔多抗和SDM-HSA兔多抗检测相应药物的灵敏度分别为46.618ng/ml,22.442ng/ml,14.0086ng/ml,73.9970ng/ml;与7种同类药物的交叉反应率最高达6.9%。SMZ-HSA抗血清经饱和硫酸铵沉淀法粗提后,葡聚糖凝胶G200柱分子筛层析,收集主峰蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳鉴定,只有一条带,说明其为电泳纯。用SMZ-HSA鼠多抗包被硝酸纤维素膜(NC膜),用SMZ-HSA纯化兔多抗与柠檬酸钠法制备的胶体金标记,制备金标蛋白复合物,建立了检测SMZ残留的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。该法简便、快速,灵敏度可达2.5ng/点,方法的特异性、重复性都较好。DIGFA检测方法与高效液相色谱法的符合率为93.01%。说明该检测方法确定的灵敏度是可信的。
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