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目的:检测肝癌(HCC)组织及正常组织中乳酸钙分布情况,分析乳酸钙对肝癌细胞增殖和转移能力的影响及其作用机制。方法:第一部分:模型组大鼠予以二乙基亚硝胺(DEN)饮用14周,复制大鼠肝癌原位模型,对照组则予以磷酸盐缓冲液(PBS)饮用14周,用HE染色组织化学方法明确原位肝癌组织及正常的肝组织,用乳酸检测试剂盒检测新鲜肝癌组织及正常肝组织中的乳酸含量,用钙离子检测试剂盒检测新鲜肝癌组织及正常组织中的钙离子含量;第二部分:以不同浓度(0mM,0.25mM,0.5mM,1mM和2mM)的乳酸钙处理肝癌细胞,模拟肝癌微环境中乳酸钙的作用,CCK8法检测乳酸钙对肝癌细胞HEPG2、HEP3B增殖的影响;克隆平板实验检测乳酸钙对肝癌细胞HEPG2、HEP3B克隆形成能力的影响;流式细胞数检测乳酸钙对肝癌细胞HEPG2、HEP3B周期及凋亡的影响;划痕实验检测乳酸钙对肝癌细胞HEPG2、HEP3B迁移能力的影响;Transwell迁移和Matrigel-Transwell浸润实验检测乳酸钙盐对肝癌细胞HEPG2、HEP3B迁移和侵袭的影响;第三部分:免疫组化检测大鼠原位组织及正常肝组织中乳酸代谢酶体及钙中性蛋白酶(Calpains)家族成员的表达,Pearson统计方法分析乳酸代谢指标与Calpains家族成员表达的相关性,应用公共数据库(GEPIA)分析乳酸代谢酶体与关键Calpains家族成员的相关性及其在肝癌的表达及预后的影响;用不同浓度乳酸钙作用后,实时荧光定量PCR和WB检测Calpains家族成员的mRNA和蛋白水平的变化,钙离子探针检测细胞内钙的变化及Calpain活性检测试剂盒检测Calpain的活性变化;免疫组化检测人肝癌组织及大鼠原位肝癌组织中Calpain S1、Calpain2以及Dicer的表达,探讨CalpainS1、Calpain2和Dicer在乳酸钙介导肝癌细胞的增殖和转移中的作用。结果:(1)成功复制大鼠原位肝癌模型;相比于新鲜肝癌组织,肝癌组织中乳酸钙含量增加;(2)乳酸钙促进HEPG2和HEP3B肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,减少细胞G1期阻滞,以及增加肝癌细胞在饥饿条件下的存活;(3)在大鼠肝癌组织及人肝癌组织中,Calpain S1与乳酸代谢酶存在共表达关系;乳酸钙处理肝癌细胞HEPG2及HEP3B后,Calpain S1的表达上调,calpains的活性增强;(4)在人肝癌组织和大鼠肝癌组织中,dicer的表达与calpainS1和Calpain2均呈负相关,乳酸钙可促进肝癌细胞HEPG2和HEP3B中的Dicer降解,使Dicer的蛋白水平减少;抑制calpain S1以及Calpain 2的表达可以逆转乳酸钙对Dicer的降解的促进作用,使肝癌细胞增殖和转移能力下降;恢复Dicer的表达可以抑乳酸钙对肝癌细胞增殖、迁移的促进作用。结论:高乳酸钙盐累积是肝癌细胞微环境的特征之一,乳酸钙可以通过促进CalpainS1的转录,促进Calpain2的表达及活性,增加Dicer蛋白的水解,进而促进肝癌细胞的增殖和转移能力。