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[目的]:
1.研究Sigma受体配体化合物对乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期、凋亡和迁移与侵袭的影响。
2.初步探讨Sigma受体配体化合物对乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期、凋亡和迁移与侵袭的作用机制，为治疗乳腺癌新药的研究提供新思路。
[方法]:
1.CCK-8法检测Sigma受体配体化合物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响；平板克隆检测Sigma受体配体化合物B003-02对乳腺癌MCF-7细胞克隆形成能力；流式细胞术检测B003-02化合物对乳腺癌MCF-7细胞周期的影响。
2.Hoechst33342荧光染色法检测B003-02化合物对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响；流式细胞仪检测B003-02化合物对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响。
3.细胞划痕实验检测B003-02化合物对乳腺癌MCF-7细胞迁移能力影响；Transwell实验检测B003-02化合物对乳腺癌MCF-7细胞迁移实验的影响；Transwell实验检测B003-02化合物对乳腺癌MCF-7细胞侵袭实验的影响。
4.Real-TimePCR检测B003-02化合物干预乳腺癌MCF-7细胞后周期相关基因（p53和p21及CyclinD1），凋亡相关基因（Bcl-2、Bax及Bad），迁移与侵袭相关基因（MMP9、MMP12、MMP21和MMP24）的表达情况。
5.Westernblot检测B003-02化合物干预乳腺癌MCF-7细胞后周期相关蛋白（p53和p21及CyclinD1）表达情况，凋亡相关蛋白表达（Bcl-2、Bax及Bad）情况，迁移与侵袭相关蛋白（MMP9、MMP12、MMP21和MMP24）表达情况。同时，Westernblot检测B003-02化合物干预乳腺癌MCF-7细胞后，PI3K-AKT信号通路蛋白（p-PI3K，PI3K，p-AKT和AKT）表达情况和p38MAPK信号通路蛋白（p-p38和p38）表达情况。
[结果]:
1.B003-02化合物干预乳腺癌MCF-7细胞后，随着化合物浓度（20μM、30μM、40μM）的增加、时间的延长（12h、24h、48h）抑制效应越明显，对MCF-7肿瘤细胞的杀伤作用越强，具有剂量-时间依赖性；5μM的B003-02化合物，可以显著性降低MCF-7细胞的克隆形成率；流式细胞术结果显示：5μM、10μM和20μM的B003-02化合物可以诱导MCF-7细胞G1期阻滞，随着化合物浓度的逐渐增加，细胞G1期阻滞越明显；Real-TimePCR和Westernblot结果显示：B003-02化合物浓度（5μM、10μM、20μM）能够通过上调p53和p21基因和蛋白的表达来抑制细胞周期基因和蛋白CyclinD1的表达。
2.B003-02化合物干预乳腺癌MCF-7细胞后，Hoechst33342荧光染色法发现乳腺癌MCF-7细胞的细胞核形态发生明显的改变，固缩为新月状或念珠状凋亡形态；流式细胞仪检测结果表明：随着化合物浓度的增加和处理时间的延长，细胞凋亡越明显，具有剂量-时间依赖性。Real-TimePCR和Westernblot结果表明：5μM、10μM和20μMB003-02化合物能显著地上调乳腺癌MCF-7细胞促凋亡相关基因和蛋白（Bax和Bad）表达，下调抗凋亡基因和蛋白Bcl-2的表达。
3.B003-02化合物干预乳腺癌MCF-7细胞后，划痕愈合实验结果显示，B003-02(10μM、20μM)可以显著性抑制乳腺癌MCF-7细胞迁移；Transwell迁移实验结果发现B003-02化合物能显著地抑制乳腺癌MCF-7细胞迁移能力；Transwell侵袭实验表明B003-02化合物能抑制乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力；Real-TimePCR和Westernblot结果表明：B003-02化合物在浓度（5μM、10μM、20μM）下，能显著地下调乳腺癌MCF-7细胞迁移与侵袭相关基因和蛋白（MMP9、MMP12、MMP21和MMP24）的表达。
4.B003-02化合物干预乳腺癌MCF-7细胞后，Westernblot结果发现B003-02化合物能显著抑制PI3K-AKT信号通路磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT的表达和p38MAPK信号通路磷酸化蛋白p-p38的表达。
[结论]:
1.Sigma受体配体化合物B003-02能够抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖和抑制其细胞周期蛋白CyclinD1的表达进而阻滞细胞周期。
2.Sigma受体配体化合物B003-02能够显著地上调乳腺癌MCF-7细胞促凋亡相关基因和蛋白（Bax和Bad）表达，下调抗凋亡基因和蛋白Bcl-2的表达进而促进细胞凋亡。
3.Sigma受体配体化合物B003-02能够显著地抑制乳腺癌MCF-7细胞中基质金属蛋白酶家族中相关基因和蛋白MMP9、MMP12、MMP21和MMP24的表达进而抑制其迁移与侵袭。
4.Sigma受体配体化合物B003-02主要分子机制是通过抑制PI3K-AKT信号通路和p38MAPK信号通路，从而发挥抗肿瘤作用。
1.研究Sigma受体配体化合物对乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期、凋亡和迁移与侵袭的影响。
2.初步探讨Sigma受体配体化合物对乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期、凋亡和迁移与侵袭的作用机制，为治疗乳腺癌新药的研究提供新思路。
[方法]:
1.CCK-8法检测Sigma受体配体化合物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响；平板克隆检测Sigma受体配体化合物B003-02对乳腺癌MCF-7细胞克隆形成能力；流式细胞术检测B003-02化合物对乳腺癌MCF-7细胞周期的影响。
2.Hoechst33342荧光染色法检测B003-02化合物对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响；流式细胞仪检测B003-02化合物对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响。
3.细胞划痕实验检测B003-02化合物对乳腺癌MCF-7细胞迁移能力影响；Transwell实验检测B003-02化合物对乳腺癌MCF-7细胞迁移实验的影响；Transwell实验检测B003-02化合物对乳腺癌MCF-7细胞侵袭实验的影响。
4.Real-TimePCR检测B003-02化合物干预乳腺癌MCF-7细胞后周期相关基因（p53和p21及CyclinD1），凋亡相关基因（Bcl-2、Bax及Bad），迁移与侵袭相关基因（MMP9、MMP12、MMP21和MMP24）的表达情况。
5.Westernblot检测B003-02化合物干预乳腺癌MCF-7细胞后周期相关蛋白（p53和p21及CyclinD1）表达情况，凋亡相关蛋白表达（Bcl-2、Bax及Bad）情况，迁移与侵袭相关蛋白（MMP9、MMP12、MMP21和MMP24）表达情况。同时，Westernblot检测B003-02化合物干预乳腺癌MCF-7细胞后，PI3K-AKT信号通路蛋白（p-PI3K，PI3K，p-AKT和AKT）表达情况和p38MAPK信号通路蛋白（p-p38和p38）表达情况。
[结果]:
1.B003-02化合物干预乳腺癌MCF-7细胞后，随着化合物浓度（20μM、30μM、40μM）的增加、时间的延长（12h、24h、48h）抑制效应越明显，对MCF-7肿瘤细胞的杀伤作用越强，具有剂量-时间依赖性；5μM的B003-02化合物，可以显著性降低MCF-7细胞的克隆形成率；流式细胞术结果显示：5μM、10μM和20μM的B003-02化合物可以诱导MCF-7细胞G1期阻滞，随着化合物浓度的逐渐增加，细胞G1期阻滞越明显；Real-TimePCR和Westernblot结果显示：B003-02化合物浓度（5μM、10μM、20μM）能够通过上调p53和p21基因和蛋白的表达来抑制细胞周期基因和蛋白CyclinD1的表达。
2.B003-02化合物干预乳腺癌MCF-7细胞后，Hoechst33342荧光染色法发现乳腺癌MCF-7细胞的细胞核形态发生明显的改变，固缩为新月状或念珠状凋亡形态；流式细胞仪检测结果表明：随着化合物浓度的增加和处理时间的延长，细胞凋亡越明显，具有剂量-时间依赖性。Real-TimePCR和Westernblot结果表明：5μM、10μM和20μMB003-02化合物能显著地上调乳腺癌MCF-7细胞促凋亡相关基因和蛋白（Bax和Bad）表达，下调抗凋亡基因和蛋白Bcl-2的表达。
3.B003-02化合物干预乳腺癌MCF-7细胞后，划痕愈合实验结果显示，B003-02(10μM、20μM)可以显著性抑制乳腺癌MCF-7细胞迁移；Transwell迁移实验结果发现B003-02化合物能显著地抑制乳腺癌MCF-7细胞迁移能力；Transwell侵袭实验表明B003-02化合物能抑制乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力；Real-TimePCR和Westernblot结果表明：B003-02化合物在浓度（5μM、10μM、20μM）下，能显著地下调乳腺癌MCF-7细胞迁移与侵袭相关基因和蛋白（MMP9、MMP12、MMP21和MMP24）的表达。
4.B003-02化合物干预乳腺癌MCF-7细胞后，Westernblot结果发现B003-02化合物能显著抑制PI3K-AKT信号通路磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT的表达和p38MAPK信号通路磷酸化蛋白p-p38的表达。
[结论]:
1.Sigma受体配体化合物B003-02能够抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖和抑制其细胞周期蛋白CyclinD1的表达进而阻滞细胞周期。
2.Sigma受体配体化合物B003-02能够显著地上调乳腺癌MCF-7细胞促凋亡相关基因和蛋白（Bax和Bad）表达，下调抗凋亡基因和蛋白Bcl-2的表达进而促进细胞凋亡。
3.Sigma受体配体化合物B003-02能够显著地抑制乳腺癌MCF-7细胞中基质金属蛋白酶家族中相关基因和蛋白MMP9、MMP12、MMP21和MMP24的表达进而抑制其迁移与侵袭。
4.Sigma受体配体化合物B003-02主要分子机制是通过抑制PI3K-AKT信号通路和p38MAPK信号通路，从而发挥抗肿瘤作用。