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本研究从广东病死肉鸽中分离了两株病毒，经HA和HI检测及分子生物学鉴定：1株为H9亚型禽流感病毒(H9-AIV GD0903)，另一1株为鸽I型副粘病毒(PPMV-1GD-09)。
根据GenBank中注册的H9亚型禽流感病毒HA基因和鸽I型副粘病毒F基因序列分别设计一对特异引物，采用RT-PCR方法扩增相应的目的片段，将cDNA片段分别克隆至pMD-18T载体进行序列测定，获得H9-AIV GD0903禽流感毒株的HA全基因序列和鸽I型副粘病毒GD-09株F基因的部分序列。序列分析结果表明：毒株GD0903的HA基因cDNA长度为1683bp，编码560个氨基酸；鸽I型副粘病毒株GD-09的F基因部分cDNA长度为259bp。目的基因扩增产物测序结果通过国际互联网提交NCBI BLAST进行联机检索，相似性在96％以上。毒株GD0903的HA受体结合位点216位为M;HA蛋白切割位点的氨基酸组成为R-S-S-R，为低致病性毒株的典型特征；系统发育进化分析表明，毒株属欧亚种系的Beijing亚群；经NCBI BLAST在线分析表明：毒株的HA全基因与参考株A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)的相似性为最高，达99％。而获得的鸽I型副粘病毒株GD-09属于基因Ⅵ型，F蛋白氨基酸的裂解位点为112R-R-Q-R-R-Fll7，具有典型的强毒株特征。
本研究根据GenBank数据库中发表的禽流感（AⅣ）的M基因，鸽I型副粘病毒(PPMV-1)的F基因，禽流感的H5亚型(AIV-H5)、H7亚型(AIV-H7)、H9亚型(AIV-H9)的HA基因以及鸽I型副粘病毒强毒和弱毒的F基因，分别在其基因保守区按照多联PCR反应引物设计原则，设计出七对特异性引物，扩增片段大小分别为385bp(AIV)、520bp(PPMV-1)、490bp(AIV-H5)、365bp(AIV-H7)、686bp(AIV-H9)、259bp(PPMV-I强毒）、522bp（PPMV-1弱毒），分别建立七种病毒或毒株的单项RT-PCR检测方法。通过琼脂糖凝胶电泳初步鉴定PCR产物后，对PCR产物纯化回收、克隆测序进行进一步鉴定，发现基因序列与对应参考株的相似性均达到96％以上，结果证明所扩增的产物均为特异性核酸片段。
在进行RNA反转录合成cDNA第一链时，运用特异性引物和随机引物分别诱导反转录合成cDNA作为模板进行PCR扩增，比较两者诱导反转录时对PCR扩增的影响，结果显示：两种方法诱导反转录时对PCR扩增效果无明显差异，且在多联RT-PCR反应时用随机引物引导反转录可以避免运用多对特异性引物诱导反转录多次加样的麻烦以及避免反转录后多余的特异引物对多联PCR反应引物浓度的优化造成的麻烦。
在建立单项RT-PCR检测方法时，对各引物PCR反应时的退火温度、引物浓度、镁离子浓度等进行了优化。在此基础上，通过优化组合，按AIV-PPMV-1，H5-H7-H9，PPMV-1强、弱毒分别组合成多联RT-PCR反应，分别对各多联RT-PCR反应的引物浓度、共同的退火温度进行了优化。根据多联RT-PCR反应优化结果，建立了AIVPPMV-I多联RT-PCR，H5-H7-H9 AIV多联RT-PCR及PPMV-1强毒、弱毒多联RT-PCR诊断体系。对该方法进行了敏感性、特异性、重复性试验，结果显示：该诊断方法①敏感性高，对特异病毒核酸检测的敏感度分别为：AIV lOOpg、PPMV-1100pg;AIV-H51000pg、AIV-H7100pg、AIV-H91000pg; PPMV-1强毒lOpg、PPMV-1弱毒10pg;②特异性强，均能够特异地检测出相应的病毒；③重复性较好。运用该方法分别对人工发病和自然发病出现典型症状的病死鸽组织进行检测，结果都能检测出特异的病毒；本研究为研制开发鸽用疫病的分子生物学诊断试剂盒奠定了良好的基础。