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目的:巨细胞病毒(CMV)是全世界范围内可引起先天性和围生期感染的重要病原体之一,尽早确诊巨细胞病毒感染有助于优生优育、发病风险评估以及后期抗病毒治疗。目前临床上通常将血清CMV-Ig M抗体作为预防产妇围生期以及小儿先天性CMV感染的常用指标。为了改善传统方法干扰因素多,反应时间长,过程繁琐等缺点,本研究旨在基于光激化学发光分析法(Li CA)技术,以鼠抗人Ig M单克隆抗体、CMV重组抗原、发光微球以及感光微球等为实验原材料,建立检测血清CMV-Ig M抗体的一套完整的Li CA分析体系,为临床提供能够微量、便捷高效的检测血清CMV-Ig M抗体的研究平台。方法:1.血清CMV-Ig M抗体光激化学发光分析法的建立基于Li CA技术建立两种分析模式,确认血清CMV-Ig M抗体的最佳检测模式,并优化反应条件,包括反应缓冲液、抗原浓度、抗体和待检血清稀释比例、感光微球加样量、加样顺序等。(1)间接法分析模式检测血清CMV-Ig M抗体将CMV重组抗原包被的发光微球,生物素标记鼠抗人Ig M单克隆抗体和待检血清共同置于液相中温浴,获得发光微球(抗原)-待检血清(Ig M抗体)-生物素(第二抗体)的复合物;随后加入链霉亲和素包被的感光微球;最后检测偶联后的荧光信号并判定结果。(2)捕获法分析模式检测血清CMV-Ig M抗体将鼠抗人Ig M单克隆抗体包被的发光微球,生物素标记CMV重组抗原和待检血清共同置于液相中温浴,获得发光微球(第二抗体)-待测血清(Ig M抗体)-生物素(抗原)的复合物;加入链霉亲和素包被的感光微球,检测偶联后的荧光信号并判定结果。2.血清CMV-Ig M抗体光激化学发光分析法的检测性能评价对本研究探讨的Li CA-CMV-Ig M抗体的分析体系进行方法学评价,其中包括确定临界指数、精密度、特异性、干扰实验、类风湿因子、血浆与血清样本检测结果的一致性。并且分别利用本研究的分析体系和LIAISON-CMV-Ig M抗体分析体系检测100例临床样本,将二者的检测结果做比对和一致性分析以评估Li CA-CMV-Ig M抗体分析体系的临床应用价值。结果:1.血清CMV-Ig M抗体光激化学发光分析法的建立优选间接法作为Li CA检测血清CMV-Ig M抗体的最终分析模式,其分析体系由CMV抗原包被的发光微球、生物素标记鼠抗人Ig M单克隆抗体与链霉亲和素包被的感光微球共同组成。经过分析条件优化,采用缓冲液0.1 mol/L p H 8.0Tris-HCl缓冲液+0.3 mol/L Na Cl溶液+0.01%吐温-20+10 mg/m L BSA、CMV抗原包被的发光微球浓度2.50μg/ml、生物素标记鼠抗人Ig M单克隆抗体稀释比例1:500、待检血清稀释比例1:400、链霉亲和素包被的感光微球加样量175μl、Li CA一步法检测血清CMV-Ig M抗体作为该检测体系的最终工作条件。2.血清CMV-Ig M抗体光激化学发光分析法的检测性能评价本研究初步建立的Li CA-CMV-Ig M抗体分析体系具有良好的检测性能。该方法的批内和批间精密度分别5.3%～6.1%和6.9%～9.8%,均<10%;与弓形虫、风疹病毒等不存在交叉反应,证明该方法具有较高特异性;血红蛋白、胆红素、甘油三酯对实验的干扰作用均较小;ROC曲线分析显示,曲线下面积为0.997,灵敏度为100%,特异度为98.9%;在100例血清样本的检测中,本方法与LIAISON分析体系的结果总体符合率为95.0%,其中阳性符合率为92.5%,阴性符合率为96.7%,灵敏度为94.9%,特异度为95.1%;并且经一致性检验,kappa=0.895,P<0.01,二者之间无统计学差异。结论:本研究初步建立了基于Li CA技术采用间接法分析模式检测血清CMV-Ig M抗体,该检测方法操作简单、快速、灵敏度高,具有良好的分析性能,可为临床提供一种新的微量,便捷高效的检测血清CMV-Ig M抗体的新方法,进一步研发将有助于未来的临床推广应用。