【摘 要】
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低密度脂蛋白(LDL)是人体内将胆固醇从肝脏运往外周组织和细胞的主要载体,也是导致动脉粥样硬化疾病的首要危险因素。目前对于LDL结构的研究,大多是使用X衍射、小角度散射和透射电子显微镜等技术表征LDL中主要载脂蛋白的结构,但这些研究方法普遍存在着忽视LDL生理环境或组成成分的缺陷,因而并没有形成统一的观点。关于LDL结构的研究,未来主要的挑战是阐明LDL上的载脂蛋白和脂质的分子结构特征以及它们之间
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低密度脂蛋白(LDL)是人体内将胆固醇从肝脏运往外周组织和细胞的主要载体,也是导致动脉粥样硬化疾病的首要危险因素。目前对于LDL结构的研究,大多是使用X衍射、小角度散射和透射电子显微镜等技术表征LDL中主要载脂蛋白的结构,但这些研究方法普遍存在着忽视LDL生理环境或组成成分的缺陷,因而并没有形成统一的观点。关于LDL结构的研究,未来主要的挑战是阐明LDL上的载脂蛋白和脂质的分子结构特征以及它们之间的相互作用,而对LDL进行脂质剔除也许是探究LDL脂质成分与蛋白结构之间的相互作用的突破口。乙基苯基聚乙二醇(NP-40)和甲基-β-环糊精(MβCD)是生物学研究中常用的两种温和的脂质剔除试剂,能够以不同方式去除细胞等生物学结构上的脂质,但是它们能否去除LDL上的脂质及其对LDL的具体影响并不清楚。本实验采取LDL作为研究对象并使用不同浓度的NP-40和MβCD对其进行处理。使用X射线衍射能谱仪、琼脂糖凝胶电泳、全自动生化仪、Zeta粒度仪和原子力显微镜等多种仪器和方法检测NP-40和MβCD对LDL的脂质组成、形貌结构以及物理化学性质影响,通过比较分析发现:适宜浓度的NP-40和MβCD均能够造成LDL脂质成分和蛋白成分相分离的现象,但是经40-80 mM的MβCD处理分离出的载脂蛋白的电荷性质与天然状态更为接近;LDL经0.64%NP-40的溶解作用和100 mM MβCD的剔除作用后分别暴露出载脂蛋白的环状和球状结构形式;但是MβCD具有更高的胆固醇剔除率(92%)和更低的甘油三酯剔除率(58%)。研究结果表明NP-40和MβCD均能够剔除LDL的脂质成分,LDL的蛋白结构和LDL脂质成分的损失程度相关。另外,本实验表明了原子力显微镜成像技术和NP-40处理相结合能够在生理状态下检测脂蛋白的结构,琼脂糖凝胶电泳和MβCD处理相结合能够从LDL中分离出与天然状态更为接近的载脂蛋白,将为未来的研究提供新的技术方法。
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