背景近年来,在癌症研究和治疗方面已经取得了重大进展。不幸的是,胰腺癌的存活率没有显著提高。胰腺癌是一种恶性程度极高的消化道肿瘤,其病情进展迅速且预后差,现在位于美国癌症相关死亡率的第四位,整体5年生存率约为9%,且其发病率约等于致死率。近些年在中国,胰腺癌发病率逐渐上升,目前是第七大常见肿瘤,且其位于癌症有关致死率的第九位。尽管有多种治疗策略,例如针对胰腺癌的化学疗法和放射疗法,但手术切除仍是主要治疗方法。目前唯一可能治愈的方法是根治性切除,然而只有不足20%的患者有根治性切除或边界可切除的手术机会,超过80%的患者发现时因已发生局部进展或远处转移而失去手术机会。并且不乐观的是,即使患者可行根治性切除,术后仍有部分患者发生早期复发或转移,据统计其中位生存期为20～24月,5年生存率为25%。目前的研究发现,胰腺的发生在很大程度上受到性别,年龄,吸烟,糖尿病,饮食不平衡,和肥胖。但是,胰腺癌的发病机制很复杂,我们对其了解还很有限。KIF23,也被称为CHO1/MKLP1(有丝分裂动蛋白样蛋白-1),是小鼠KIF23的人类同源物。作为KIF家族的一员,KIF23扮演着分子马达的角色,它是一种正端导向的运动酶,在体外移动反平行微管(MTS),可以在特定时间点将微管(MTS)运送到不同细胞内的明确位置,在微管(MTS)的捆绑和运输中发挥重要作用。目前有多项研究表明,KIF23在肺癌,乳腺癌,神经胶质瘤,耐紫杉醇的胃癌中有过表达,且KIF23的过表达与几种癌症的预后不良有关。有研究表明KIF23在胞质分裂中发挥关键的作用,当KIF23功能出现障碍时会导致胞质分裂异常,在细胞中会出现双核或多核,而这往往预示着癌细胞的出现。方法:1:在GEPIA网站,通过公开的TCGA数据分析了癌组织和癌旁组织KIF23的mRNA水平的表达差异。然后采用KIF23的mRNA的表达量中位值将胰腺癌分为高低两组,分析两组预后差异。2:采用免疫组化染色实验检测胰腺癌组织中KIF23的表达差异,根据表达情况分为高低表达两组,之后收集患者的临床病理资料,分析患者临床病理特征与KIF23表达量之间的统计学意义。3:应用慢病毒转染技术,在PANC-1和Bx PC-3两种细胞株中载入特异性sh RNA用以敲低KIF23,并将空白质粒转染入两种细胞株作为对照组,培养48h后。将培养基更换为含2μg/ml嘌呤霉素的培养基,筛选出稳定克隆的KIF23降表达细胞株,随后运用PCR技术及Western blot实验检测沉默效率,将筛选出的细胞株冻存备用。4:运用克隆形成实验和MTT实验,观察KIF23的表达量对细胞增殖的影响。运用Western blot实验检测Ki67和PCNA在各细胞系中表达的差异,此实验用以验证KIF23表达量对细胞增殖的影响。5:行体外动物实验。将降表达KIF23的稳定PANC-1细胞系和对照组PANC-1细胞系分别注射入裸鼠皮下,每3天测试一次瘤体大小,注射29天后处死小鼠,收集瘤体,将瘤体剪碎研磨收集肿瘤细胞,行免疫组化实验检测两组KIF23和Ki67的表达差异。6:在GEPIA网站,查阅KIF23与CDCA8的关联性。在Gene Cards查阅KIF23与CDCA8的关联性。在GEPIA通过公开的TCGA数据分析了癌组织和癌旁组织CDCA8的mRNA水平的表达差异。然后采用CDCA8的mRNA的表达量中位值将胰腺癌分为高低两组,分析两组预后差异。7:连续切片并运用免疫组化检测同一位置胰腺癌组织中的KIF23和CDCA8的表达差异。根据CDCA8表达情况将病人分为高低表达两组,分析患者临床病理特征与CDCA8表达量之间的统计学意义。分析KIF23和CDCA8的相关性。结果:1:在GEPIA网站,通过分析TCGA数据,我们发现在胰腺癌组织中KIF23的mRNA的表达量高于癌旁组织(P<0.05)。并且取其中位值为截止点,将所有患者分为高低表达两组,且各有89人,结果显示高表达组的总生存期和无病生存期较差。2:免疫组化结果为高表达组的染色效果强且主要位于在细胞核,低表达组的染色效果弱或者无。在临床特征关系方面KIF23的高表达与肿瘤大小(P=0.04)有统计学意义,而与年龄(P=0.088)、性别(P=0.278)、分化程度(P=0.113)没有统计学意义。3:特异性sh RNA和空质粒成功转染到PANC-1和Bx PC-3两种细胞株,经过嘌呤霉素筛选后得到稳定克隆的细胞系,通过PCR技术测得两组细胞内KIF23的mRNA表达量有明显差异,sh RNA转染组的mRNA表达量降低。而Western blot实验结果示与对照组相比sh RNA转染组的KIF23的蛋白表达量明显降低。4:克隆形成实验和MTT实验均显示与对照组相比,sh RNA组的细胞增殖被抑制。Western blot实验结果示与对照组相比,sh RNA组的细胞内Ki67和PCNA的表达量明显降低。5:经过29天的测量,sh RNA组的肿瘤明显比对照组的肿瘤小。免疫组化结果示sh RNA组的KIF23和Ki67蛋白表达量与对照组相比明显少。6:在GEPIA网站,我们查到KIF23和CDCA8明显相关(P<0.05)。在Gene Cards网站我们查到KIF23和CDCA8之间存在相互作用。在GEPIA网站,我们发现在胰腺癌组织中CDCA8的mRNA的表达量高于癌旁组织(P<0.05)。并且取中位值为截止点,将所有患者分为高低表达两组,且各有89人,结果显示高表达组的总生存期和无进展生存期较差。7:我们分析了CDCA8与临床特征的相关性,发现CDCA8蛋白的高表达与肿瘤大小(P=0.026)有统计学意义,而与年龄(P=0.259)、性别(P=0.186)、分化程度(P=0.165)没有统计学意义。连续切片免疫组化结果示CDCA8的蛋白表达量与KIF23的表达量高低趋势一致,并且CDCA8与KIF23之间有关联性(P<0.05)。结论:1:KIF23的表达水平与胰腺癌的临床病理特征及预后相关。2:KIF23可促进胰腺癌细胞的增殖。3:KIF23与CDCA8在作用机制方面有相关性。