精子载体制备FecB转基因太行山羊技术的研究

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精子介导的基因转移是指以精子作为外源基因的载体,在受精时将外源基因导入卵母细胞,使受精卵中含有外源基因,是目前转基因动物研究中简单而高效的方法之一。脂质体可用于转基因的研究,利用脂质体可以和细胞膜融合的特点,将外源基因送入细胞内部。本实验利用脂质体介导精子转染的方法,研究了精子在介导基因转移过程中精子与外源基因结合的影响因素,并对精子载体法制备FecB转基因太行山羊进行了初步研究。试验结果如下:   1.精子充分离心洗涤后,再与脂质体-DNA复合物混合,可显著提高脂质体介导精子转染外源DNA的效率。DNaseI消化前,洗涤组转染精子阳性率为38%,而未处理精液组精子阳性率为14%;DNaseI消化后,洗涤组转染精子阳性率为21%,而未处理精液组精子阳性率为5%,差异极显著(P<0.01)。   2.脂质体介导法可使外源DNA透过细胞膜内化进入精子胞质或胞核内,精子转染外源DNA用DNaseI消化后能检测到精子中外源DNA的存在。太行山羊精子与外源DNA混合培养后,用荧光原位杂交检测到18.3%的精子结合有外源DNA,脂质体Lipofectamine2000介导后比率增加至38.7%,两法的统计学分析存在显著性差异(P<0.01)。   3.利用共培养法转染外源DNA,用DNaseI消化后,能检测到精子中外源DNA的存在,山羊精子具有自发的结合外源DNA的能力。   4.对18只太行山羊母羊进行诱导发情处理,精子与FecB基因共孵育后,对发情母羊进行输精,受孕率为51%,共产生后代12只,经过PCR检测,未发现阳性后代。
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