猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与特性研究

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2006年5月,我国江西省首先发生了猪“高热病”,随后蔓延至全国。该病具有流行范围广、发病地区多、死亡率高等特点,致使200多万头猪受到感染,出现了40万死亡病例,给我国养猪业造成了巨大的损失。该病在福建省于7月份出现,传播迅速。我们收集了来自疑似发生了“高热病”的不同猪场病料,进行了病毒分离和鉴定,运用RT-PCR技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)。在我省某猪场分离到一株PRRSV,我们对该病毒做了相关生物学特性的研究,包括接种细胞的生长特性、红细胞凝集特性、TCID50等。为了明确该株PRRSV的致病性,将分离到的PRRSV细胞培养液经鼻、肌肉注射途径分别接种PRRSV抗体阴性的健康猪,剂量为2.0 mL,并设健康猪接种正常细胞培养物作为阴性对照。隔离饲养,每目测体温,并观察其采食、饮水、精神状况及其他临床表现。对死亡病猪剖检,观察组织病变。取典型病变部位做病理切片,观察其具体组织病理变化。结果表明该病毒的毒力比普通PRRSV强,发病猪症状与普通PRRSV感染有区别,且病理变化较通常明显。设计合成10对特异性引物来扩增PRRSV的ORF2~7基因及NSP2基因。将这些片断分别克隆到T载体,转化大肠杆菌DH5α,抗性筛选,通过对转化子的酶切鉴定,筛选出阳性克隆,送往生物公司测序。结果表明该病毒的NSP2基因出现缺失,但是属于美洲型毒株。
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