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目的:
通过观察经痛灵冲剂对急性寒凝血瘀证大鼠血液流变性的影响,及其对痛经模型大鼠镇痛作用和调节相关激素水平的作用,初步探讨其防治寒凝血瘀痛经的作用机制,为临床运用提供实验室依据,并为本方的进一步开发奠定基础。
第一部分经痛灵冲剂对寒凝血瘀证大鼠血液流变性的影响方法:
将50只Wistar雌性大鼠体重(220~250g)随机分为5组,每组10只,分别为空白对照组、模型组、经痛灵高、低剂量组及元胡止痛片组。空白对照组、模型组每天灌胃给水2ml/只,其余各组每天灌胃给对应药2ml/只,连续7天。除空白对照组外,其余各组大鼠于第七天皮下注射肾上腺素(Adr)0.08ml/100g两次,两次间隔4小时。在两次注射Adr之间将大鼠浸入冰水5分钟,次晨断头取血,检测血液流变学中全血粘度(ηb)的高切变率(Hγ)、低切变率(Lγ)和血浆粘度(ηp)、红细胞压积(HCT)、红细胞电泳指数(HE)、红细胞聚集指数(RE)等多项指标。
结果:
1 对全血粘度(nb)的影响全血粘度低切变率(Lγ):模型组(27.27±10.23,单位mPa·S,下同)明显高于空白对照(21.30±3.31),经痛灵高剂量组(19.49±11.17)、低剂量组(22.58±11.23)和元胡止痛片组(23.24±13.07)均明显低于模型组(P<0.05或P<0.01),经痛灵高剂量组与元胡止痛片组相比也具有显著性差异(P<0.05)。全血粘度高切变率(Hγ):模型组(11.31±3.17,单位mPa·S,下同)明显高于空白对照组(8.51±2.26),经痛灵高剂量组(8.09±3.19)、低剂量组(8.90±3.21)均明显低于模型组和元胡止痛片组(10.58±2.26)(P<0.05),而元胡止痛片组与模型组相比无显著性差异(P>0.05)。
2 对血浆粘度的影响(ηp)模型组血浆粘度(1.96±0.62,单位mPa·S,下同)明显高于空白对照组(1.56±1.12),经痛灵高剂量组(1.54±0.67)、低剂量组(1.55±0.8)和元胡止痛片组(1159±1.19)均明显低于模型组(P<0.05),而经痛灵高、低剂量组、元胡止痛片组之间无显著性差异(P>0.05)。
3 对红细胞压积的影响(HCT)模型组红细胞压积(55.29±18.34)明显高于空白对照组(44.56±10.31)。经痛灵高剂量组(43.38±22.96)、低剂量组(47.35±20.09)和元胡止痛片组(50.63±26.97)均明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。经痛灵高剂量组也明显低于元胡止痛片组(P<0.05),而低剂量组与元胡止痛片组相比无显著性差异(P>0.05)。
4 对红细胞电泳指数(HE)的影响模型组红细胞电泳指数(7.98±2.23)明显高于空白对照组(5.46±1.19)。经痛灵高剂量组(4.53±1.41)、低剂量组(5.39±2.39)和元胡止痛片组(6.18±1.89)均明显低于模型组(P<0.05或P<0.01),经痛灵高剂量组、低剂量组与元胡止痛片组相比也具有显著性差异(P<0.05)。 5 对红细胞聚集指数(RE)的影响模型组红细胞聚集指数(3.17±1.66)明显高于空白对照组(2.52±0.49)。经痛灵高剂量组(2.39±1.22)、低剂量组(2.63±1.24)均明显低于模型组和元胡止痛片组(3.01±2.01)(P<0.05或P<0.01),而元胡止痛片组与模型组相比无显著性差异(P>0.05)。
以上结果提示,经痛灵冲剂能够明显改善寒凝血瘀证大鼠各项血流变指标,而且部分指标的改善优于元胡止痛片。
第二部分经痛灵冲剂防治大鼠痛经的作用及机制研究
方法:
将50只、Wistar雌性大白鼠随机分为5组,每组10只,分别为空白对照组、模型组、经痛灵高、低剂量组和元胡止痛片组。除空白对照组外,其余4组大鼠连续皮下注射已烯雌酚10d,每天1次(第1天0.8mg/只,第2至9天0.41mg/只,第10天0.8mg/只)。注射第5天开始灌胃给药(水),连续7天。末次给已烯雌酚后24小时,给药(水)40min后,腹腔注射缩宫素2u/只。观察记录30min内大鼠扭体反应发生率和扭体次数,以扭体反应作为子宫收缩(痛经)的指标。然后断头取血,检测雌二醇(E2)孕酮(P)的含量。快速剥取子宫组织称重、匀浆,采用放免方法检测前列腺素F<,2a>(PGF<,2a>)前列腺素E<,2>(PGE<,2>)的含量。
结果:
1 阴道组织学检查除空白对照组外,其余4组大鼠阴道组织在阴道涂片上有层层迭迭的脱落的角化细胞。表明4组大鼠处于相同动情周期。
2 对子宫系数的影响与空白对照组大鼠子宫系数(1.93±0.38,单位mg/g,下同)相比,模型组(2.29±0.22)、元胡止痛片组(2.21±0.19)、经痛灵高剂量(2.20±0.17)、低剂量组(2.19±0.20)大鼠子宫系数均明显增大(P<0.01)。这表明大鼠在雌激素作用下出现子宫内膜增生等生理或病理改变。
3 对痛经大鼠扭体反应的影响空白对照组大鼠无扭体反应,其余各组大鼠均出现了明显的扭体反应(扭体发生率达60~90%),表明造模成功。与模型组大鼠扭体次数(16.81±5.24)相比,经痛灵高剂量组(6.21±5.30)、低剂量组(10.69±4.16)和元胡止痛片组(11.98±2.26)大鼠扭体次数明显减少(P<0.05或P<0.01),经痛灵高剂量组与元胡止痛片组比较也具有显著性差异P<0.05)。
4 对子宫组织PGF<,2a>、PGE<,2>含量的影响模型组大鼠子宫组织中PGF<,2a>含量(94.98±31.12单位pg/ml,下同)明显高于空白对照组(59.09±30.66)。与模型组相比,经痛灵高剂量组(62.25±52.32)、低剂量组(74.18±23.23)和元胡止痛片组(77.28±29.15)均明显降低(P<0.05或P<0.01),经痛灵高剂量组与元胡止痛片组比较也具有显著性差异(P<0.05)。
与模型组大鼠子宫组织中PGE<,2>含量(71.54±20.19,单位pg/ml,下同)相比,经痛灵高剂量组PGE<,2>含量(120.07±31.50)明显升高(P<0.01),而经痛灵低剂量组(83.80±26.99)、元胡止痛片组(81.59±22.29)与模型组相比无显著性差异(P>0.05)。另外,高、低剂量经痛灵还可明显降低PGF<,2a>/PGE<,2>比值(P<0.05),经痛灵高剂量组PGF<,2a>/PGE<,2>比值还明显低于元胡止痛片组(P<0.05)。
5 对血清E<,2>、P含量的影响与模型组血清E2含量(270.11±79.19,单位pg/ml,下同)相比,经痛灵高剂量组(203.01±69.23)和低剂量组(205.63±110.61)明显降低(P<0.01),而且,经痛灵高、低剂量组还明显低于元胡止痛片组(P<0.05)。与模型组血清P含量(45.21±27.30)相比,经痛灵高剂量组(89.05±4.55)和低剂量组(75.21±37.85)明显升高(P<0.01),而且,经痛灵高、低剂量组还明显高于元胡止痛片组(P<0.05)。
结论:
1 冰水浸泡加之皮下注射A出可致大鼠各项血流变指标发生异常,类似中医寒凝血瘀征象,而高、低剂量经痛灵对寒凝血瘀证大鼠血液流变学指标均有显著的改善作用,尤以高剂量作用明显。
2 注射已烯雌酚和缩宫素,可致大鼠出现类似痛经表现,扭体反应次数和发生率明显升高,而高、低剂量经痛灵能够明显减少痛经大鼠扭体次数,提示其对痛经大鼠具有较好的镇痛作用。
3 经痛灵可明显降低痛经大鼠子宫PGF<,2a>含量,升高PGE<,2>含量,降低PGF<,2a>/PGE<,2>比值,从而抑制子宫平滑肌收缩,降低子宫平滑肌紧张度;同时,经痛灵能够明显降低痛经大鼠外周血E<,2>含量,升高P含量,调节相关激素平衡,抑制PGs的异常合成。这些可能是本方预防和治疗痛经的重要机制之