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体细胞核移植、转基因动物等的研究已成为胚胎工程技术发展的热点和方向,但其效率很低。制约胚胎工程进一步发展的瓶颈是卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养技术,体外培养体系的不完善导致卵母细胞和胚胎代谢及基因表达的紊乱,从而导致体外生产胚胎效率和质量的下降,因此进一步完善卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养体系具有重要的理论及实践意义。本研究着重于模拟体内环境,系统研究了卵丘细胞与卵母细胞或早期胚胎体外共培养的各种条件,以期建立一套稳定的共培养体系。 1. 研究了卵丘细胞单层共培养对牛未成熟卵母细胞体外成熟的影响。结果发现共培养对 A,B 级卵母细胞体外成熟没影响,但能显著提高由 C 级卵母细胞去除卵丘细胞而得到的裸卵的成熟率。 2.研究了不同蛋白质添加物:牛大卵泡液(BFF)、发情山羊血清(OGS)及胎牛血清(FBS)对牛未成熟卵母细胞与卵丘细胞单层共培养成熟的影响。发现三种蛋白质添加物对卵母细胞体外成熟后体外受精胚的卵裂率没有显著影响,但囊胚发育率以牛大卵泡液组最高(37.6%),显著高于 FBS 组(25.2%)(P<0.05),OGS 组囊胚率介于 BFF 和 FBS 组之间,但和二者都没有显著差异。 3. 以卵丘细胞为共培养细胞单层,比较了简单培养基 SOFaa、CR1aa 和复杂培养基 TCM199 对牛孤雌胚发育的影响,在这三种培养基中,牛孤雌胚囊胚发育率分别为 36.08%,32.64%和 11.24%,SOFaa、CR1aa 组囊胚发育率显著高于 TCM199组(P<0.01),并且在 SOFaa、CR1aa 中囊胚孵化率也比在复杂培养基 TCM199中显著提高(P<0.01),说明 SOFaa、CR1aa 等简单培养液较复杂培养液 TCM199更适合做为卵丘细胞与牛体外胚共培养体系的培养液。 4. 比较了不同蛋白质添加物:牛大卵泡液(BFF)、发情山羊血清(OGS)及胎牛血清(FBS)对共培养体系中牛孤雌胚发育的影响,牛大卵泡液和发情山羊血清组囊胚发育率分别为 46.83%和 48.90%,二者没有显著差异,但二者的囊胚率显著高于胎牛血清组的 27.72%(P<0.01)。实验结果显示,牛大卵泡液和发情山羊血清较胎牛血清更能促进牛早期胚胎在卵丘细胞共培养体系中的发育。 5. 研究了不同共培养时期对牛早期胚胎发育的影响。牛胚胎 0~4 d 与卵丘细胞单层共培养组和 1~10 d 共培养组相比囊胚发育率(43.51% VS 48.82%)和囊胚孵化 (65.67 % VS 73.60%)差异都不显著,但都显著高于 4~10 d 共培养组,4~10 d 共培养与对照组(全部培养时间都不用共培养)相比,胚胎囊胚发育率没有显著提高,但囊胚孵化率显著提高(P<0.05)。