【摘 要】
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目的在使用组织块法体外分离、培养人牙周膜细胞群的基础上,探讨杨梅素对非炎性条件下人牙周膜细胞群增殖能力与成骨能力的影响,以及在大肠杆菌脂多糖刺激作用下,炎性条件时
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目的在使用组织块法体外分离、培养人牙周膜细胞群的基础上,探讨杨梅素对非炎性条件下人牙周膜细胞群增殖能力与成骨能力的影响,以及在大肠杆菌脂多糖刺激作用下,炎性条件时杨梅素对人牙周膜细胞群增殖能力及分泌细胞因子的影响。方法1、使用组织块法对牙周膜细胞群进行原代培养,在倒置显微镜下观察牙周膜细胞群的形态学特征,免疫组化染色法鉴定细胞来源,MTS测细胞生长曲线,并进行矿化诱导,茜素红染色观察矿化结节;2、MTS法检测1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L和100μmol/L浓度杨梅素对牙周膜细胞群增殖能力的影响;采用ALP试剂盒检测1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L浓度杨梅素对牙周膜细胞群早期成骨能力的影响;3、MTS法检测20μmol/L浓度杨梅素对100μg/ml大肠杆菌脂多糖作用下牙周膜细胞群增殖能力的影响;采用ELISA技术检测20μmol/L浓度杨梅素对100μg/ml大肠杆菌脂多糖作用下牙周膜细胞群分泌IL-1β和TNF-α的影响。2μg/m L地塞米松作为阳性对照组参与比较。结果1、倒置显微镜下观察牙周膜细胞群原代培养5-12 d游离出组织,胞体多为长梭形或三角形,细胞两端伸出的胞突较细长,可有分叉,胞质均匀,胞核居中、圆或卵圆形。少量细胞形态为多角形且胞体略小。免疫组化染色结果显示:第4代牙周膜细胞群波形丝蛋白强阳性表达,角蛋白染色阴性表达。细胞生长曲线测定显示第4代牙周膜细胞群生长曲线呈倒S形。矿化诱导28 d示大量矿化结节形成,钙盐沉积,茜素红染色呈红色。2、杨梅素对牙周膜细胞群增殖能力与成骨能力的影响:在24 h、48 h和72 h三个时间点,10μmol/L和20μmol/L浓度杨梅素均可促进人牙周膜细胞群的增殖。在3 d、5 d、7 d时5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L浓度杨梅素均可促进碱性磷酸酶(ALP)活性,且呈浓度依赖性。3、杨梅素对大肠杆菌脂多糖作用下牙周膜细胞群增殖能力及分泌细胞因子的影响:20μmol/L浓度杨梅素在不同时间点均能减轻LPS对PDLP增殖的抑制作用。20μmol/L浓度杨梅素能够抑制LPS作用下PDLP分泌IL-1β和TNF-α。结论1、适宜浓度的杨梅素对人牙周膜细胞群增殖能力有促进作用;2、适宜浓度的杨梅素促进人牙周膜细胞群成骨分化;3、20μmol/L浓度杨梅素能减轻大肠杆菌脂多糖对人牙周膜细胞群增殖能力的抑制作用;4、20μmol/L浓度杨梅素能抑制大肠杆菌脂多糖作用下人牙周膜细胞分泌IL-1β和TNF-α。
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