增殖细胞核抗原(PCNA)通过与真核细胞中的DNA聚合酶和其他细胞蛋白相互作用,对于DNA复制,细胞周期进程,细胞增殖和发育是必不可少的。在哺乳动物细胞中,p55PIK的N末端含有独特的小结构域,氨基酸序列由24个氨基酸残基(N24)组成。由于该结构域干扰p55PIK与PCNA的相互作用抑制细胞周期,因此该结构域对PCNA-p55PIK相互作用的抑制被认为是可行的抗癌策略。那么,N24是否可以抑制酵母增殖和细胞周期,从而作为一种抑制真菌感染的靶向药物?以酿酒酵母为研究对象,观察N24调控下酵母的生长曲线;流式检测N24多肽对酵母细胞周期的影响;q-PCR分析N24对G1期和S期细胞周期素CLN1和CLB5的影响;超表达POL30蛋白,将POL30蛋白和N24-beads进行pulldown实验,SDS-PAGE和Western blot检测POL30蛋白与N24多肽的结合;纯化和浓缩POL30蛋白,使其达到结晶要求的纯度和浓度,利用POL30-N24共结晶的方法,使POL30与N24之间的相互作用在X射线晶体结构中可视化。N24抑制酵母细胞增殖,通过流式检测空白组和N24组的细胞周期,发现N24将酵母细胞周期抑制在G1期;荧光定量PCR检测结果表明,N24多肽下调CLN1和CLB5两个细胞周期素的含量;通过pulldown实验,SDS-PAGE和Western blot检测结果说明POL30蛋白可以与N24特异性结合;得到了纯度很高的POL30蛋白,并且浓度在20mg/mL以上,获得了POL30-N24的共结晶,通过晶体衍射,确定了N24和其他POL30结合蛋白的结合方式类似,结合在POL30的域间结合环(IDCL)和C末端附近的残基。N24下调酵母G1期和S期的细胞周期素CLN1和CLB5,可以与POL30蛋白结合,抑制酵母增殖和细胞周期。虽然我们无法通过对酵母蛋白质数据库的序列相似性搜索来鉴定酿酒酵母中N24的同源物,但是该研究的结果表明存在由p55PIK的功能同源物介导的类似信号传导途径。因此,酿酒酵母是设计基于N24的抗癌治疗剂的合适模型,并且该工作中描述的相同策略适用于其他信号传导蛋白。