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本文从一下几个方面进行论述：
第一部分PDE4抑制剂对HFD小鼠脂肪肝及并发高血压的作用
目的：原发性高血压与代谢综合征，胰岛素抵抗以及非酒精性脂肪肝的发展密切相关。最近有研究表明，磷酸二酯酶4（PDE4）-cAMP信号通路与代谢综合征的病理生理学发展相关，然而，PDE4在非酒精性脂肪肝及并发高血压病中的作用及机制研究甚少。本实验的目的是探究PDE4抑制剂roflumilast对HFD小鼠脂肪肝及血管功能的影响。
方法：小鼠随机分成5组：正常对照组(NC)、高脂模型组(HFD)、正常给药组(Rof-Control)、预防给药组(Rof-Prevention)及治疗给药组(Rof-Therapy)。通过组织化学方法检测肝脏组织病理学变化；试剂盒检测血生化指标；血压计测量小鼠血压；微血管张力测定仪测定各组小鼠血管功能；GTT，ITT检测糖耐量和胰岛素耐量；同时利用Real-time qPCR以及Western Blot等分子生物学技术检测胰岛素信号通路及PDE4亚型的变化。
结果：（1）PDE4抑制剂roflumilast改善HFD小鼠糖脂代谢紊乱、胰岛素抵抗及肝脏脂肪变性；（2）Roflumilast改善HFD小鼠血压及动脉舒缩功能；（3）Roflumilast降低HFD小鼠肝脏PDE4D mRNA及蛋白水平。
结论：Roflumilast可能通过降低肝脏PDE4D表达改善HFD小鼠糖脂代谢及血管功能。
第二部分 肝脏PDE4D在脂肪肝及并发高血压中的作用及机制
目的：基于PDE4抑制剂roflumilast可能通过抑制肝脏PDE4D表达，改善小鼠糖脂代谢紊乱，胰岛素抵抗以及高血压，我们对PDE4D在脂肪肝及并发高血压中的作用及机制进行了进一步探讨。
方法：小鼠尾静脉注射AAV8肝脏特异性过表达PDE4D，小鼠随机分成2组：空载对照AAV8-GFP组、AAV8-PDE4D组。注射四周后，通过组织化学的方法对肝脏组织进行病理学分析；血压计测量小鼠血压；微血管张力测定仪测定各组小鼠血管功能；GTT，ITT检测糖耐量和胰岛素耐量；同时利用Western Blot检测各组小鼠PDE4D水平以及胰岛素信号通路变化；体外培养肝原代细胞，给予棕榈酸（PA，palmitate）刺激24h模拟肝脂肪变模型，油红O染色观察脂质沉积程度；运用PDE4抑制剂roflumilast抑制PDE4D，siRNA沉默PDE4D，PDE4D质粒pcDNA3.1过表PDE4D，来研究PDE4D对PA诱导的肝细胞脂质沉积和胰岛素抵抗的影响；利用Real-time qPCR以及Western Blot等分子生物学技术检测信号通路及脂代谢相关基因的变化。
结果：（1）AAV8-PDE4D组小鼠PDE4D在肝脏特异性表达增加，而肌肉，脂肪及主动脉PDE4D水平无明显变化。（2）肝脏过表PDE4D导致显著的肝脏脂质沉积，全身及肝脏和脂肪组织出现胰岛素抵抗，但体重和肝脏重量以及糖代谢无明显变化。（3）AAV8-PDE4D组小鼠血压升高，对乙酰胆碱（Ach）诱导的血管舒张反应减弱，对Phe诱导的血管收缩反应增加。（4）药物抑制或基因沉默肝细胞PDE4D可显著减少PA诱导的肝细胞脂质沉积以及肝细胞胰岛素抵抗；过表PDE4D可加剧PA诱导的肝细胞脂质沉积。（5）沉默CD36可逆转过表PDE4D引起的PA诱导的肝细胞脂质沉积及胰岛素抵抗加剧，过表CD36亦可阻断PDE4D-siRNA在PA诱导的肝细胞脂质沉积及胰岛素抵抗中的保护作用。（6）降低肝细胞PDE4D表达可抑制JAK2-STAT3通路；过表PDE4D可激活JAK3-STAT3通路，增加脂肪酸转运酶CD36表达，而阻断STAT3可显著降低PDE4D诱导的肝细胞CD36表达以及肝细胞脂质沉积。（7）SIRT1介导PDE4D对JAK2-STAT3信号通路的调控。
结论：肝脏PDE4D表达增加可诱导肝脂肪变性以及高血压，可能与抑制SIRT1的表达从而激活JAK2-STAT3信号通路增加CD36表达，促进肝细胞脂肪摄取有关。
第一部分PDE4抑制剂对HFD小鼠脂肪肝及并发高血压的作用
目的：原发性高血压与代谢综合征，胰岛素抵抗以及非酒精性脂肪肝的发展密切相关。最近有研究表明，磷酸二酯酶4（PDE4）-cAMP信号通路与代谢综合征的病理生理学发展相关，然而，PDE4在非酒精性脂肪肝及并发高血压病中的作用及机制研究甚少。本实验的目的是探究PDE4抑制剂roflumilast对HFD小鼠脂肪肝及血管功能的影响。
方法：小鼠随机分成5组：正常对照组(NC)、高脂模型组(HFD)、正常给药组(Rof-Control)、预防给药组(Rof-Prevention)及治疗给药组(Rof-Therapy)。通过组织化学方法检测肝脏组织病理学变化；试剂盒检测血生化指标；血压计测量小鼠血压；微血管张力测定仪测定各组小鼠血管功能；GTT，ITT检测糖耐量和胰岛素耐量；同时利用Real-time qPCR以及Western Blot等分子生物学技术检测胰岛素信号通路及PDE4亚型的变化。
结果：（1）PDE4抑制剂roflumilast改善HFD小鼠糖脂代谢紊乱、胰岛素抵抗及肝脏脂肪变性；（2）Roflumilast改善HFD小鼠血压及动脉舒缩功能；（3）Roflumilast降低HFD小鼠肝脏PDE4D mRNA及蛋白水平。
结论：Roflumilast可能通过降低肝脏PDE4D表达改善HFD小鼠糖脂代谢及血管功能。
第二部分 肝脏PDE4D在脂肪肝及并发高血压中的作用及机制
目的：基于PDE4抑制剂roflumilast可能通过抑制肝脏PDE4D表达，改善小鼠糖脂代谢紊乱，胰岛素抵抗以及高血压，我们对PDE4D在脂肪肝及并发高血压中的作用及机制进行了进一步探讨。
方法：小鼠尾静脉注射AAV8肝脏特异性过表达PDE4D，小鼠随机分成2组：空载对照AAV8-GFP组、AAV8-PDE4D组。注射四周后，通过组织化学的方法对肝脏组织进行病理学分析；血压计测量小鼠血压；微血管张力测定仪测定各组小鼠血管功能；GTT，ITT检测糖耐量和胰岛素耐量；同时利用Western Blot检测各组小鼠PDE4D水平以及胰岛素信号通路变化；体外培养肝原代细胞，给予棕榈酸（PA，palmitate）刺激24h模拟肝脂肪变模型，油红O染色观察脂质沉积程度；运用PDE4抑制剂roflumilast抑制PDE4D，siRNA沉默PDE4D，PDE4D质粒pcDNA3.1过表PDE4D，来研究PDE4D对PA诱导的肝细胞脂质沉积和胰岛素抵抗的影响；利用Real-time qPCR以及Western Blot等分子生物学技术检测信号通路及脂代谢相关基因的变化。
结果：（1）AAV8-PDE4D组小鼠PDE4D在肝脏特异性表达增加，而肌肉，脂肪及主动脉PDE4D水平无明显变化。（2）肝脏过表PDE4D导致显著的肝脏脂质沉积，全身及肝脏和脂肪组织出现胰岛素抵抗，但体重和肝脏重量以及糖代谢无明显变化。（3）AAV8-PDE4D组小鼠血压升高，对乙酰胆碱（Ach）诱导的血管舒张反应减弱，对Phe诱导的血管收缩反应增加。（4）药物抑制或基因沉默肝细胞PDE4D可显著减少PA诱导的肝细胞脂质沉积以及肝细胞胰岛素抵抗；过表PDE4D可加剧PA诱导的肝细胞脂质沉积。（5）沉默CD36可逆转过表PDE4D引起的PA诱导的肝细胞脂质沉积及胰岛素抵抗加剧，过表CD36亦可阻断PDE4D-siRNA在PA诱导的肝细胞脂质沉积及胰岛素抵抗中的保护作用。（6）降低肝细胞PDE4D表达可抑制JAK2-STAT3通路；过表PDE4D可激活JAK3-STAT3通路，增加脂肪酸转运酶CD36表达，而阻断STAT3可显著降低PDE4D诱导的肝细胞CD36表达以及肝细胞脂质沉积。（7）SIRT1介导PDE4D对JAK2-STAT3信号通路的调控。
结论：肝脏PDE4D表达增加可诱导肝脂肪变性以及高血压，可能与抑制SIRT1的表达从而激活JAK2-STAT3信号通路增加CD36表达，促进肝细胞脂肪摄取有关。