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衰老是一种普遍现象,而抗衰老一直是科研的热点之一。衰老的自由基理论阐明,衰老过程中的退行性变化是由于机体代谢产生的自由基的氧化作用引起的,降低其氧化作用,就会在一定程度上减少自由基对机体的损害。因此,寻找一种通过抗氧化达到清除自由基目的的天然药物成为抗衰老药研究热点。金福菇是一种优质食用菌,前景广阔。本实验室前期研究发现,金福菇多糖TLH-3组分能有效的清除氧自由基和抑制红细胞溶血及丙二醛的产生,并具有较高的抗氧化活性,其清除超氧阴离子的IC50为126μg/mL,与Vc在同一数量级水平(111μg/mL)。因此,金福菇多糖TLH-3是否也具有相当的抗衰老活性有待进一步研究。本实验通过建立细胞和动物衰老模型,探究金福菇多糖TLH-3对细胞周期及衰老相关蛋白的表达等方面的影响,从细胞及动物水平研究金福菇多糖TLH-3的抗衰老作用和机制,为人类的延年益寿提供科学的依据,为开发多糖类药物提供理论依据。(1)检测金福菇多糖TLH-3对t-BHP诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)的凋亡保护作用。本实验以HELF细胞为研究对象,首先用MTT法将不同浓度TLH-3对t-BHP作用下HELF细胞的生长情况进行了检测,进而运用Hoechst33342/PI双染法观察保护作用,Annexin V-FITC/PI流式细胞术分析TLH-3对t-BHP作用下的HELF细胞凋亡的影响。结果表明,与t-BHP诱导组相比,TLH-3处理组的细胞存活率较高,而且随着TLH-3浓度的增大,细胞存活率升高；与正常对照组相比,t-BHP诱导组凋亡和坏死细胞明显增加,TLH-3干预组细胞生长状况有所改善且与剂量呈正相关,说明TLH-3对细胞具有一定的保护作用。(2)探讨金福菇多糖TLH-3对HELF细胞衰老模型的作用。首先用t-BHP进行过氧化诱导建立细胞衰老模型,同时用不同浓度多糖进行干预,检测各组细胞周期及p21蛋白表达。与模型组相比,金福菇多糖TLH-3可以缓解t-BHP引起的G1期细胞阻滞现象,说明金福菇多糖TLH-3可以在一定程度上延缓过氧化损伤导致的细胞衰老。(3)研究金福菇多糖TLH对D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠的作用。首先用D-半乳糖诱导小鼠建立小鼠衰老模型,同时小鼠灌胃金福菇多糖TLH进行干预,检测其皮肤羟脯氨酸含量,血清、心脏SOD活力、MDA含量,HE染色观察小鼠病理学变化,免疫组化法分析p21蛋白表达情况。结果显示,与模型组小鼠相比,TLH处理组小鼠的皮肤羟脯氨酸含量有所增加；免疫组化检测分析显示,衰老相关蛋白p21在各组小鼠的表达量差异不明显；但多糖TLH处理组小鼠体内的SOD活力明显升高,MDA含量下降。