细胞穿膜肽Tat是一种能携带生物大分子物质进入细胞的一段氨基酸序列，通过这种方式进入细胞的大分子物质会保持其原有生物学活性，这种特性为将目的蛋白转入细胞提供了新的途径。本试验在表达得到具有穿膜功能的Hsp70-Tat-Hsp70的基础上，通过将其加入胚胎培养液中，统计囊胚发育率和孵出率的方法，研究在培养液中添加Tat-Hsp70融合蛋白对小鼠早期胚胎发育影响。试验方法及结果如下:　　 1.小鼠Tat-Hsp70原核表达载体的构建及表达　　 TRIzol法提取小鼠肝脏总RNA，经反转录和PCR扩增，将扩增产物连接到pMD-18T载体上，并转化入大肠杆菌DH5α中，阳性菌落经PCR鉴定后进行测序。以pMD-18T/Hsp70质粒为模板，利用PCR的方法成功将Tat基因连入，并构建成pEASY-E1/Tat-Hsp70表达载体，测序鉴定后进行蛋白表达。结果显示该蛋白以可溶性蛋白形式存在，最佳表达条件为:温度30℃，IPTG浓度0.5 mmol/L，诱导时间3h，western blot检测说明其具有生物学活性。　　 2.含有Tat-Hsp70融合蛋白的CZB培养对小鼠早期胚胎发育的影响　　 分别配制CZB及TCZB（含有Tat-Hsp70融合蛋白的CZB培养液），当胚胎发育到4细胞后，将胚胎随机分组,分别换用CZB和TCZB进行培养，换液2h后分别进行39℃和41℃的热应激处理2h，处理完毕恢复37℃正常温度进行培养，分别统计囊胚发育率和孵出率，以37℃正常培养的胚胎为对照。结果显示39℃热应激后，囊胚发育率和孵出率在CZB组（80.2±5.4和73.4±6.2）与TCZB组（81.3±4.5和76.5±7.6）间无显著差异(P＞0.05)，与对照组(83.7±6.1和75.6±4.5)比亦无显著差异(P＞0.05);而41℃热应激后，囊胚发育率和孵出率在CZB组（80.2±5.4和73.4±6.2）、TCZB组(81.3±4.5和76.5±7.6)与对照组三组之间存在显著差异(P＜0.05)，对照组高于TCZB组，TCZB组高于CZB组。上述结果说明:　　 1）TCZB培养液虽有利于提高小鼠胚胎抵御外界环境升高带来的影响，但仍然不能抵消热应激带给胚胎的影响。　　 2）在胚胎培养液中添加Tat-Hsp70融合蛋白，可以提高体外培养小鼠胚胎的热耐受性。