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柑桔类水果是全世界产量最大的水果之一、也是一种重要的经济植物,皮渣作为其主要副产物占柑桔总量的20%~40%,具有较大的利用价值;据研究,柑桔皮中含有丰富的生物活性物质—黄酮类化合物。黄酮类药物具有抗脑缺血作用、抗心肌缺血作用、抗心律失常作用、镇痛作用、保肝护肝作用、对消化性溃疡的保护作用、抗病毒、抗肿瘤作用等。此外,还有大量研究表明黄酮类天然产物有效成分有降压、降血脂、抑制血小板聚集等多种药理作用,说明天然产物黄酮类有效成分确有多种生物学活性。为此,受到各国政府和医药、食品等行业的高度重视和关注。而黄酮类有效成分的提取又是其研发和应用的关键技术和阶段之一,但到目前为止,对柑桔皮黄酮资源提取方面的研究报道还不多,纯化工艺和化学成分研究鲜见报道。为开发利用该资源,论文对其提取、分离、纯化及化学成分结构鉴定进行了研究。现将主要结果报告如下:1、建立以芦丁为标准品的柑桔皮黄酮类含量测定方法,采用3种紫外—可见分光光度法对不同条件处理下的柑桔皮中总黄酮含量进行了测定和比较分析。研究表明,3种分光光度测定方法中,黄酮含量以硝酸铝显色法(345 nm)为最高,直接测定法(270 nm)次之,氯化铝显色法(415 nm)最低;经过HPLC检测后,选定氯化铝(275 nm)为显色系统的含量测定方法。2、为确定最优的提取条件,利用中心组合设计对柑桔皮总黄酮纤维素酶法辅助提取工艺中的浸提时间(X2)、浸提温度(X4)、pH值(X3)和酶用量(X1)4因子的最优化组合进行了定量研究,建立并分析了各因子与黄酮得率(Y)关系的数学模型:Y=-17.41531250+7.14583333X1+0.11956250X2+2.52125000X3+0.25337500X4-6.36458333X1*X1-0.00064896X2*X2+0.00862500X2*X3-0.32958333X3*X3-0.01275000X3*X4-0.00204583X4*X4。结果表明:最佳的工艺条件为酶用量0.55%、时间123 min、pH值4.4、温度48℃。经试验验证,在此条件下,黄酮得率(3.51±0.13)%(n=3),与理论计算值3.621669%基本一致。回归模型能较好地预测柑桔皮中总黄酮的提取得率。3、对柑桔皮中的总黄酮进行微波提取,采用L16(44)正交优化试验,以探讨微波功率、液料比、辐照时间、pH值和提取次数对柑桔皮黄酮提取率的影响。正交试验结果表明,微波法提取总黄酮的最佳条件是:微波功率400 W,辐照时间180 s,液料比50,pH值5。在此条件下提取两次,所得总黄酮含量为3.37%。4、采用二次通用旋转组合设计研究了柑桔皮中总黄酮的超声波辅助提取工艺,并对建立的数学模型Y=-10.20174246+0.19594606X1+1.32168206X2+0.19143333X3+0.00024257X1*X4-0.00125581X2*X4-0.00144333X1*X1-0.10808333X2*X2-0.00363833X3*X3-0.00006954X4*X4进行了规划求解及试验验证。结果表明:pH值(X2)对总黄酮得率(Y)有极显著影响,乙醇浓度(X1)、液料比(X3)以及时间(X4)同乙醇浓度之间和时间同pH值之间的交互项对总黄酮得率有显著影响,超声时间对总黄酮得率无明显影响。经试验验证,当pH值为5.6、乙醇浓度为75%、液料比为26、超声时间为80 min时总黄酮得率最高,达(3.314±0.063)%(n=3),与理论计算值3.348449%基本一致。回归模型可较好地预测柑桔皮中总黄酮的提取得率。5、采用反相高效液相色谱测定了不同提取条件下柑桔皮中橙皮苷和柚皮苷的含量。色谱柱为ODS C18柱(150 mm×4.6 mm i.d.),流动相为甲醇—水(体积比为40/60),流速为1.0 mL/min,检测波长270 nm,柱温25℃。橙皮苷和柚皮苷的线性范围分别为0.007168g/L~0.28g/L和0.012288g/L~0.48 g/L;二者含量分别为17.5~21.9 mg/g(RSD=2.2~3.1%)和2.14~2.39 mg/g(RSD=2.8~3.7%);其平均回收率分别为96.5~101.4%(RSD=2.3~3.3%)和97.3~103.6%(RSD=2.8~3.6%)。6、采用95%(V/V)、70%(V/V)醇提柑桔皮粉,经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取后,再利用硅胶柱层析、聚酰胺柱吸附、Sephadex LH—20等方法分离纯化,得到36个组分。