【摘 要】
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GES-1细胞系是我室经SV40T转化的胎儿胃粘膜上皮永生化细胞系,可在体外稳定传代,并且在裸鼠中不致瘤,MC细胞系是GES-1细胞经胃癌相关化学致癌剂亚硝酰胺代表物N甲基N硝基胍嘧
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GES-1细胞系是我室经SV40T转化的胎儿胃粘膜上皮永生化细胞系,可在体外稳定传代,并且在裸鼠中不致瘤,MC细胞系是GES-1细胞经胃癌相关化学致癌剂亚硝酰胺代表物N甲基N硝基胍嘧啶(MNNG)处理获得.而Key-1A6是利用差异显示法比较GES-1和MC细胞得到的基因片段之一(GenBank:gi11464475,AF072718)[i],Key-1A6在GES-1细胞中高表达[2].利用NCBIBLAST发现Key-1A6基因与Schwirzke在不转移的乳腺癌细胞系中经差异显示克隆得到的DRIM(Down-Regulated In Metastasis)基因(gi 3242214,)[3]在C端约3000bp同源性为100％,具有相同的开放阅读框架,认为两者是同一个基因,命名为1A6/DRIM.1A6/DRIM基因定位于12q23.2-23.3,eDNA全长9017bp,有62个外显子,编码2785个氨基酸,预测蛋白质分子量为318.43KD,等电点为7.07.因为1A6/DRIM基因编码的蛋白分子量大,在生物信息学中预测到的功能较复杂,NCBI分析1A6/DRIM蛋白可能有两种形式存在,而且目前的研究发现1A6/DRIM是一个重要的肿瘤相关基因,所以针对这一新基因制备特异性强的抗体对于功能的研究非常重要.经ELISA检测示多克隆抗体(我们称之为HR-1)的效价为10-5,以HR-1来检测BGC-823细胞的核浆内容物中1A6/DRIM蛋白的表达情况,Western Blot显示在1:500时可以显示特异性的条带,分子量约为310kDa,与生物信息学预测结果一致,而且与1A6/DRIM基因的C端制备的单克隆抗体识别的蛋白质的位置相同,可以说明多克隆抗体HR-1与C端的单克隆抗体特异性相同,通过多肽合成的方法成功的获得了1A6/DRIM蛋白的N端抗体.以HR-1来检测1A6/DRIM基因在各种细胞内的表达情况,多次反复实验总结1A6/DRIM在胃癌、肝癌、乳腺癌细胞系中高表达,如在胃癌细胞系BGC-823、KATO-Ⅲ、肝癌细胞系HepG2、乳腺癌细胞系MCF-7和T47D、宫颈癌细胞系HeLa中表达,在血液肿瘤细胞系U266中不表达.通过免疫荧光的方法检测1A6/DRIM在细胞内的定位情况,结果显示1A6/DRIM主要定位在细胞核内.
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