研究背景：近年来，随着现代研究技术和方法的不断发展，中药治疗眼部疾病的疗效被进一步肯定。许多单味中药及复方制剂被现代药理证明具有抗炎、改善循环、提高免疫力、抗氧化等作用，它们在眼部疾病的防治中发挥着重要作用。川芎嗪(ligustrazine)是从中药川芎中提取的有效成分，具有扩张血管、抗血小板聚集、改善组织微循环、调节脂质代谢、抗脂质过氧化、抑制平滑肌细胞和成纤维细胞增生、抗组织纤维化和调节免疫等多种药理作用。近年大量的实验研究表明，川芎嗪对视网膜损伤疾病有一定的作用，包括对糖尿病视网膜病变(diabetic retinophathy，DR)和视网膜缺血再灌注损伤的保护作用、对高眼压下视网膜神经节细胞和双极细胞损伤的保护作用、对增殖性玻璃体视网膜病变的防治作用及对遗传性视网膜色素变性小鼠的治疗作用等方面。临床上已广泛应用于眼科疾病的防治并取得了一定的疗效，是一种具有广阔眼科应用前景的中药。目前，临床应用的盐酸川芎嗪剂型主要有注射剂与片剂，还未见有眼局部应用剂型的报道。有研究表明，川芎嗪经腹腔注射后能进入兔眼房水、玻璃体和视网膜组织，但其在眼内组织消除快，药效持续时间短，而全身注射用药的次数又受患者的依从性和药物的不良反应等因素的影响，从而使其在眼科方面的应用受到一定的限制。因此，将盐酸川芎嗪开发成一种常用的眼局部应用剂型，既方便患者用药，又进一步增强其疗效和降低副作用，是眼科中药的研究方向之一。 目的： (一)制备处方合理的盐酸川芎嗪滴眼液，以延长其眼部滞留时间，提高其生物利用度和疗效。 (二)考察兔眼局部应用盐酸川芎嗪滴眼液后的眼内穿透性，并测定其在不同时间房水和玻璃体的浓度，计算其药代动力学参数，研究药代动力学特点。 (三)制备稳定性好、包封率高、缓释性能优的盐酸川芎嗪脂质体。 方法：(一)以玻璃酸钠为载体制备盐酸川芎嗪滴眼液，建立高效液相色谱法测定其含量，并对其稳定性、刺激性、pH值、渗透压等指标进行考察。 (二)健康新西兰白兔54只，随机分为2组，分别为实验组和对照组，实验组于兔眼滴入盐酸川芎嗪玻璃酸钠滴眼液，对照组于兔眼滴入盐酸川芎嗪磷酸盐缓冲液，并分别于0、2.5、5、15、30、60、120、180和240 min取房水和玻璃体液，每个时间点3只白兔6只眼。采用高效液相色谱法(high performanceliquid chromatography，HPLC)测定盐酸川芎嗪浓度。DAS2.1.1 软件拟合药代动力学参数。 (三)采用正交试验设计法筛选制备盐酸川芎嗪脂质体的处方和制备工艺，凝胶柱层析法和高效液相色谱法测定其包封率。 结果：(一) 本品为无色透明液体，平均渗透压为 300.44 mOsm/kg．H<,2>O，RSD为1.06％，pH值为 5.76，RSD 为 1.08％，在6个月内稳定。所建立的含量测定方法可靠，盐酸川芎嗪在 1.88～18.8μg．mL<-1> 范围呈良好线性关系(r=0.9998)，平均回收率为 100.21％，RSD 为 0.95％。 (二)兔眼滴用盐酸川芎嗪后，盐酸川芎嗪玻璃酸钠滴眼液实验组在房水和玻璃体中的盐酸川芎嗪浓度较盐酸川芎嗪磷酸盐缓冲液对照组高，用药 30 min后，两组间各时间点在房水中的盐酸川芎嗪浓度相比有显著差异 (P<0.05或P<0.01)，而玻璃体中 15 min后便有显著差异(P<0.05或P<0.01)。滴用盐酸川芎嗪玻璃酸钠滴眼液或盐酸川芎嗪磷酸盐缓冲液后，盐酸川芎嗪浓度在房水和玻璃体中的变化均呈二室模型。实验组和对照组盐酸川芎嗪在房水中的药代动力学参数分别为：达峰浓度(C<,max>)：16.202±2.564和15.785±2.988μg．mL<-1>，达峰时间(t<,max>)：0.083和0.083 h，吸收相半衰期(t<,1/2a>)：0.539±0.243和0.410±0.206 h，平均滞留时间 (MRT)：0.682±0.048 和 0.518±0.026 h，消除相半衰期(t<,1/2β>)：0.857±0.378 和 0.612±0.240 h，曲线下面积 (AUC)：14.584±2.950 和 10.185±1.854 μg．mL<-1>．h<-1>，清除率 (CL)：1.418±0.277 和1.868±0.401 L．h<-1>。实验组和对照组盐酸川芎嗪在玻璃体中的药代动力学参数分别为：达峰浓度(C<,max>)：1.128±0.0241 和 0.824±0.140 μg．mL<-1>，达峰时间(t<,max>)：0.25 和 0.25 h，吸收相半衰期 (t<,1/2α>)：0.141±0.031 和 0.139±0.06 h，平均滞留时间 (MRT)：1.171±0.030 和 1.021±0.047 h，消除相半衰期(t<,1/2β)：0.925±0.103 和 0.870±0.086 h，曲线下面积(AUC)：1.148±0.225和0.723±0.135μg．mL<-1>．h<-1>，清除率 (CL)：17.970±3.421 和 28.471±5.297 L．h<-1>。对照组和实验组在同一组织相应药代动力学参数 t 检验结果表明，盐酸川芎嗪在房水和玻璃体中的药代动力学参数：MRT、AUC及CL均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。t 检验分析结果表明，盐酸川芎嗪在房水和玻璃体中的浓度在各时间点有显著差异(P<0.05或P<0.01)，房水中盐酸川芎嗪浓度较玻璃体中的浓度高。 (三)制备盐酸川芎嗪脂质体的处方和工艺为：采用硫酸铵梯度法制备盐酸川芎嗪脂质体。最佳工艺条件为：药物：脂质(w/w)为1∶10，硫酸铵浓度为0.3mol．mL<-1>，孵育温度为45℃，孵育时间为20 min。脂质体的平均包封率为(30.04±0.54)％。 结论：(一)本实验制备的盐酸川芎嗪玻璃酸钠滴眼液稳定性好，质量可控，澄明度、渗透压、pH值等指标符合滴眼液的要求。 (二)以玻璃酸钠为媒介的盐酸川芎嗪滴眼液眼局部应用具有良好的眼内通透性，能进入房水和玻璃体，同时具有一定的缓释效应，并能提高生物利用度。 (三) 本实验已初步探讨出制备盐酸川芎嗪脂质体的处方和工艺。