亳菊炮制工艺及炮制前后的化学成分和保肝药效初步研究

来源 :安徽中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:oswaldhui
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目的菊花来源于菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序,具有散风清热、平肝明目、清热解毒的功效。亳菊主产于安徽亳州,为十大皖药之一。临床多生用,但是其性微寒,易损伤脾胃,经炒制后可缓和其辛凉之性,利于脾胃不适者使用。安徽中医药大学第一附属医院国医大师徐经世先生善用炒菊花,临床多用于治疗肝肾阴虚、水亏火旺、视物不清等方剂中,疗效显著。本课题旨在优化菊花的炒制工艺,分析比较菊花炒制前后化学成分差异及其对CCl4所致小鼠急性肝损伤的保护作用,以期为临床合理选择菊花炮制品提供参考。方法1菊花炒制工艺的优化及炮制前后“质”、“量”比较采用多指标正交实验法,以炒制温度和炒制时间为考察因素,将菊花中绿原酸、木犀草苷、3,4-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草素、芹菜素和总黄酮含量作为评价指标,结合外观性状,优选菊花的炒制工艺;在此炒制工艺的基础上,采用UPLC法建立生、炒菊花的指纹图谱,利用SIMCA 13.0软件对生、炒菊花进行聚类分析和主成分分析;并比较菊花炒制前后6种成分的含量变化。2菊花炒制前后化学成分差异研究在建立生、炒菊花UPLC指纹图谱及对菊花炒制前后6个成分进行定量分析的基础上,采用超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)定性分析了菊花炒制前后化学成分。将UNIFI软件与Mass Lynx V4.1软件结合,借助主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)和变量重要性投影(VIP)数据统计分析方法,寻找炒制前后差异性成分。3菊花炒制前后对CCl4所致小鼠急性肝损伤的保护作用研究将90只昆明种雄性小鼠,随机分为9组,即正常组、模型组、联苯双脂组(阳性对照)、生菊花高、中、低剂量组、炒菊花高、中、低剂量组,每组10只。各给药组连续灌胃7 d,正常组和模型组灌胃等量的生理盐水,末次给药后1 h,除正常组外,各给药组均腹腔注射0.2%CCl4橄榄油溶液(0.1 m L/10 g),建立CCl4所致小鼠急性肝损伤模型。禁食不禁水24 h后,摘除小鼠眼球取血,脱臼处死小鼠并分离肝脏。测定小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)含量,肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,观察肝组织病理学变化,研究菊花炒制前后对CCl4所致小鼠急性肝损伤的保护作用。结果1菊花炒制工艺的优化和炮制前后“质”、“量”比较(1)优选出菊花的炒制工艺为炒制温度130℃,炒制时间8 min,炒至颜色呈深黄色。(2)建立了生、炒菊花的UPLC指纹图谱,标定15个共有峰,各色谱峰的保留时间差异较小,炒制前后相对峰面积差异较大。聚类分析和主成分分析明显将生、炒菊花分为两类,说明菊花炒制前后内在质量存在差异。(3)含量测定结果表明,菊花炒制前后6种成分含量发生显著变化,经过炒制后绿原酸、3,4二咖啡酰基奎宁酸和3,5-二咖啡酰基奎宁酸含量显著降低,木犀草苷、木犀草素和芹菜素含量显著升高。2菊花炒制前后化学成分差异研究生、炒菊花中鉴定出28个化学成分,差异性成分有18个。结合“第一章”研究结果,菊花炒制前后6个成分含量变化显著,共分析出20个具有显著性差异的成分。13个成分炒制后含量升高:cynaroside,luteolin,apigenin,1,3-dicaffeoylquinic acid,apigenin-7-o-glucoside,diosmetin-7-o-rutinoside,acacetin-7-o-glucoside,acacetin-7-o-glucuronide,hesperetin,gallic acid,isorhamnetin,eriodictyol,scopoletin。7个成分炒制后含量降低:chlorogenic acid,3,4-dicaffeoylquinic acid,3,5-dicaffeoylquinic acid,diosmetin-7-o-glucuronide,diosmetin-7-o-beta-d-glucopyranoside,luteolin-7-o-glucuronide,apigenin-7-o-glucuronide。3菊花炒制前后对CCl4所致小鼠急性肝损伤的保护作用研究与模型组比,生、炒菊花高、中、低剂量组均能显著降低小鼠肝脏指数、血清中AST、ALT含量,升高SOD含量;生、炒菊花高、中剂量组能显著降低肝组织中MDA含量。肝组织病理学观察结果表明,生、炒菊花高、中、低剂量组肝组织损伤程度均有所改善,肝索逐渐出现,炎症细胞浸润减少,细胞核肿胀减少。说明生、炒菊花均可减轻CCl4所致小鼠急性肝损伤。结论本课题优选出的菊花炒制工艺稳定可行;菊花炒制前后化学成分存在“质”、“量”差异;生、炒菊花对CCl4所致小鼠急性肝损伤均有保护作用;课题的研究结果,为菊花炒制工艺的建立和临床合理选择菊花炮制品提供参考。
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