CD4分子是一类主要存在于T细胞表面的单链跨膜糖蛋白，它在淋巴细胞分化和参与细胞免疫方面起重要作用。 本研究根据已经发表的莱航鸡CD4分子基因序列，设计合成一对引物，通过PCR的方法从三黄鸡的cDNA文库中克隆出了其CD4胞外区基因片段，构建重组质粒pGEM-chCD4。将克隆获得的目的片段与表达载体pMAL-p2X连接而构建重组表达质粒。构建的重组表达质粒转化到大肠杆菌TB1中，筛选含重组质粒的基因工程菌。重组工程菌经IPTG诱导得到高效表达，其细胞裂解物用SDS-PAGE进行检测，并经Amylose树脂亲和层析柱纯化表达蛋白，纯化蛋白命名为MBP-chCD4。用MBP-chCD4按照常规的方法免疫清洁级BALB/c小鼠，6周后收集血清，用间接ELISA法测定抗血清的效价。 结果表明，本研究成功地克隆了三黄鸡CD4胞外区基因，其大小为1206bp。所构建的表达质粒pMAL-p2X/chCD4在E.coli TB1中成功表达了分子量约为87.5KDa的融合蛋白，与预测的大小一致。表达产物经Amylose树脂亲和层析柱分离纯化，得到了高纯度的鸡CD4胞外区的融合蛋白。 利用此蛋白免疫小鼠，制备了ELISA效价达1:8.192×10<6>的鼠源抗三黄鸡CD4胞外区的抗体，证明该蛋白具有良好的抗原性，为进一步研究鸡CD4分子的结构和功能及其之间的关系奠定了基础。