【摘 要】
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伪狂犬病病毒是严重影响养猪业发展的重要病毒,该病毒粒子具有较强的抵抗力。gE基因是伪狂犬病病毒的毒力基因和基因缺失疫苗的缺失基因。本实验在伪狂犬病病毒gE和gB基因区域
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伪狂犬病病毒是严重影响养猪业发展的重要病毒,该病毒粒子具有较强的抵抗力。gE基因是伪狂犬病病毒的毒力基因和基因缺失疫苗的缺失基因。本实验在伪狂犬病病毒gE和gB基因区域内分别设计两对引物,和一条gE荧光探针,利用荧光定量PCR原理,结合PE7700检测系统,首次建立了定量和鉴别检测伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的荧光定量PCR方法。结果表明gE-MGB Taqman PCR灵敏度达10~1拷贝数量级,线性范围为10~7-10~1copies/reaction,达7个数量级。其灵敏度显著高于gE-SYBR green PCR和普通PCR。应用gE-MGB-Taqman PCR检测18份冰冻组织样品,阳性率为15/16(除2份弃去),与血清中和结合细胞MTT比色试验结果比较,符合率为100%。此方法以闭管的模式操作,减少了以后步骤污染的可能性,整个PCR检测过程少于2个小时。
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