【摘 要】
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猪传染性胸膜肺炎(Porcine conagious pleuropneumonia,PCP)是由猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumooniae,APP)引起的一种猪的传染性呼吸道疾病。自1987年我国首次发现此病,迅速在全国蔓延,目前已成为猪呼吸道疾病的主要疫病之一,对我国养猪业造成了巨大经济损失。本研究对2016年9月到2018年12月安徽地区疑似PCP感
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猪传染性胸膜肺炎(Porcine conagious pleuropneumonia,PCP)是由猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumooniae,APP)引起的一种猪的传染性呼吸道疾病。自1987年我国首次发现此病,迅速在全国蔓延,目前已成为猪呼吸道疾病的主要疫病之一,对我国养猪业造成了巨大经济损失。本研究对2016年9月到2018年12月安徽地区疑似PCP感染的送检病死猪进行APP分离鉴定,对分离菌株进行形态学及染色镜检观察、生化试验、“卫星”现象、溶血现象和PCR鉴定,结果显示,共分离到5株APP,分离株菌落和染色镜检形态及生化特性均符合APP生物学特性;与APP参考菌株一样,均能扩增出342bp目的条带。对APP分离菌株进行NAD依赖试验和PCR血清分型。发现5株APP分离菌株生长都需要NAD,为生物1型;其中4株为血清12型,1株是血清2型。分别对5株APP分离株进行药物敏感性试验,结果显示5株APP分离株对环丙沙星、恩诺沙呈、氟苯尼考、头孢曲松、头孢噻肟均为100%敏感,其次对氧氟沙星为80%敏感;对链霉素、新霉素为1 00%耐药。提示临床对APP治疗用药,应选择喹诺酮类和头孢类药物,避免使用氨基糖苷类药物。APP血清型众多,其中以血清2型在世界范围内流行最广。本研究对本次分离鉴定的APP血清2型AH-QS01菌株进行生长曲线、致病力和免疫保护力测定,结果显示菌株AH-QS01菌株毒力强,免疫原性良好,但是生长浓度较低,且稳定期短。为了提升和优化AH-QS01菌株的生长浓度,选用6周龄昆明系小鼠作为实验动物,进行APP感染测定实验。使用1.O×109 CFU/只的AH-QS01菌株腹腔接种小鼠,分别对小鼠肝脏和肺脏进行细菌回收,测定细菌生长曲线,筛选出生长浓度最高,稳定期长的APP菌株作为下一代攻毒菌株。在小鼠体内连续传代直至菌株浓度达到1.O×109 CFU/mL且稳定期超过2h,作为候选菌株。然后对该菌株进行LD50和免疫保护率测定。经过在小鼠体内传5代后,回收菌株(QS01-M5)的菌液浓度峰值由初始的8.3×108 CFU/mL提升到2.24×109CFU/mL,且稳定期显著延长,同时与初代菌株相比毒力和免疫保护率未发生明显变化。本研究丰富了安徽地区APP的生物学资料,揭示APP血清12型是安徽地区的流行血清型,为临床用药和疫苗免疫措施提供理论依据。同时本研究筛选出适应小鼠且生长浓度明显增强的小鼠适应株,提示APP在昆明系小鼠体内增殖效果较好,为APP相关研究提供技术参考。
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